1.一種可溶性淀粉底物特異性提高的環糊精糖基轉移酶，其特征在于，是在環糊精葡萄糖基
轉移酶N-末端融合了自組雙親短肽，構建短肽融合型環糊精糖基轉移酶；所述自組雙親短肽
的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示；所述短肽融合型環糊精糖基轉移酶的氨
基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示。
2.攜帶編碼權利要求1所述環糊精糖基轉移酶的基因的質粒、基因工程菌或轉基因細胞系。
3.一種產權利要求1所述酶的基因工程菌的構建方法，具體步驟如下：
1)采用化學全合成或PCR方法克隆編碼所述短肽融合型環糊精葡萄糖基轉移酶基因；
2)將步驟1)獲得的短肽融合型環糊精葡萄糖基轉移酶基因連接到大腸桿菌表達載體，
得到重組表達載體；
3)將步驟2)獲得的重組表達載體轉化大腸桿菌Escherichia?coli?BL21(DE3)得到基因工
程菌。
4.一種應用權利要求3所述方法構建得到的大腸桿菌基因工程菌。
5.一種應用權利要求4所述基因工程菌發酵生產環糊精葡萄糖基轉移酶的方法，以產短肽融
合型環糊精葡萄糖基轉移酶的基因工程菌為生產菌株，活化后按4％接種量將種子發酵液接到
含100μg/mL氨芐青霉素的TB液體培養基；在30℃搖床培養至OD600＝0.6，加入0.1mM終
濃度的IPTG誘導胞外表達，并在25℃搖床繼續培養發酵90h后，將發酵液于4℃、10000rpm
離心20min除菌體，收集富含環糊精葡萄糖基轉移酶的上清液。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，向所述上清液中加入70％固體硫酸銨鹽析過夜，
4℃、10000rpm離心20min，取沉淀物用含20mM磷酸鈉、0.5M氯化鈉、20mM咪唑、pH7.4
的緩沖液A溶解，并在緩沖液A中透析過夜后，通過0.22μm膜過濾后制成上樣樣品；Ni
親和柱用緩沖液A平衡后，將上樣樣品吸入Ni柱，使之完全吸附后，分別用緩沖液A、含
20-480mM咪唑的緩沖液A、含480mM咪唑的緩沖液A洗脫，流速1mL/min，檢測波長為
280nm，分部收集含CGTase酶活的洗脫液；活力組分在pH＝6的50mM磷酸鈉緩沖液中透
析過夜后，分別得到純化的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示的融合酶。
7.權利要求1所述環糊精糖基轉移酶在生產2-O-α-D-吡喃型葡萄糖基-L-抗壞血酸中的應用。
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