本發(fā)明涉及用于釋放與維生素D-結合蛋白結合的維生素D化合物的試劑組合物，用于檢測維生素D化合物的體外方法，其中通過使用該試劑組合物，使得所述維生素D化合物從維生素D-結合蛋白釋放，且還涉及以該方式獲得的試劑混合物。所使用的試劑含有濃度為0.1M至2.0M的碳酸氫鹽或者能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO)的物質。本發(fā)明還涉及所披露的用于釋放維生素D化合物的試劑組合物的用途以及用于檢測維生素D化合物的試劑盒，其含有常見檢測試劑之外的用于釋放除維生素D化合物的試劑組合物。

1.用于從維生素D-結合蛋白釋放維生素D化合物的體外方法，包括以
下步驟：
a)提供待研究的樣品以及
b)使步驟(a)的樣品與以下物質混合：
i)含有濃度為0.1M至2.0M的碳酸氫鹽或者濃度為0.1M至2.0M
的能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO₃^-)的物質的試劑，
ii)還原劑，和
iii)堿化劑，
由此從維生素D-結合蛋白釋放所述維生素D化合物。
2.權利要求1的方法，其中所述步驟(i)的試劑在用于從維生素D-結合
蛋白釋放維生素D化合物的適當條件下在水溶液中為可溶的。
3.權利要求1至2中任一項的方法，其中所述步驟(i)的試劑含有濃度
為0.1M至2.0M的碳酸氫鹽。
4.權利要求1至2中任一項的方法，其中所述步驟(i)的試劑含有濃度
為0.1M至2.0M的能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO₃^-)的物質。
5.權利要求1的方法，其中能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO₃^-)的
所述物質為環(huán)狀或者非環(huán)狀的碳酸酯或者其各自的羥基化或者鹵化衍生物。
6.權利要求1的方法，其中所述樣品為液體樣品。
7.權利要求1的方法，其中所述樣品為血液、血清或者血漿。
8.用于測量維生素D化合物的體外方法，包括以下步驟：
a)根據權利要求1至7中任一項的方法從維生素D-結合蛋白釋放維生
素D化合物，以及
b)測量步驟(a)中釋放的維生素D化合物。
9.權利要求8的方法，其中所述維生素D化合物選自25-羥基維生素
D₂、25-羥基維生素D₃、24,25-二羥基維生素D₂、24,25-二羥基維生素D₃和
C3-表-25-羥基維生素D。
10.權利要求9的方法，其中確定了所述維生素D化合物為25-羥基維
生素D₂和/或者25-羥基維生素D₃。
11.試劑組合物用于從維生素D-結合蛋白釋放維生素D化合物的用途，
所述試劑組合物包含選自以下的物質：濃度為0.1M至2.0M的碳酸氫鹽或
者濃度為0.1M至2.0M的能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO₃^-)的物質，
以及還原劑。
12.權利要求11的用途，其特征在于所述還原劑選自2-巰基乙醇、2-
巰基乙胺-HCl、TCEP、半胱氨酸-HCl、二硫蘇糖醇(DTT)、N-甲基馬來酰亞
胺、Ellman試劑和1,2-二硫雜環(huán)戊烷-3-羧酸。
13.權利要求11的用途，其特征在于所述還原劑選自2-巰基乙醇、2-
巰基乙胺-HCl、TCEP、半胱氨酸-HCl和二硫蘇糖醇(DTT)。
14.權利要求11至13中任一項的用途，其特征在于所述還原劑具有2
mM至30mM的濃度。
15.試劑混合物，包含待研究的樣品、試劑組合物以及堿化劑，其中所
述試劑組合物包含選自以下的物質：濃度為0.1M至2.0M的碳酸氫鹽或者
濃度為0.1M至2.0M的能夠在水解后釋放碳酸氫根離子(HCO₃^-)的物質，以
及還原劑；其中所述堿化劑選自NaOH、KOH、Ca(OH)₂和LiOH，以及所
述樣品為血液、血清或者血漿。
16.試劑組合物以及堿化劑在將維生素D化合物從維生素D-結合蛋白
釋放中的用途，其中所述試劑組合物包含選自以下的物質：濃度為0.1M至
2.0M的碳酸氫鹽或者濃度為0.1M至2.0M的能夠在水解后釋放碳酸氫根
離子(HCO₃^-)的物質，以及還原劑；其中所述堿化劑選自NaOH、KOH、Ca(OH)₂
和LiOH。