本發明公開了一種結核T細胞釋放γ?干擾素檢測試劑盒及其使用方法，所述檢測試劑盒，包括結核T細胞釋放γ?干擾素檢測微粒懸浮液、結核T細胞釋放γ?干擾素檢測試劑卡組件、測試培養管T、本底對照培養管N、陽性對照培養管P和γ?干擾素質控品，結核T細胞釋放γ?干擾素檢測微粒懸浮液，為共價聯接了鼠抗γ?干擾素單克隆抗體的發光微粒和保存液的混合物。用于定量檢測血漿樣本中結核T細胞釋放γ?干擾素的含量，本發明將熒光免疫定量分析法通過引入光激發光技術與納米微球技術，不僅成功的解決了以上試劑盒操作復雜，對技術人員要求高的缺點，并且縮短了檢測時間，具有靈敏度、特異性較高的優點。

1.結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，包括：(1)結核T細胞釋放γ-干
擾素檢測微粒懸浮液、(2)結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑卡組件、(3)測試培養管T、(4)
本底對照培養管N、(5)陽性對照培養管P和(6)γ-干擾素質控品；
所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測微粒懸浮液，為共價聯接了鼠抗γ-干擾素單克
隆抗體的發光微粒和保存液的混合物；
所述的發光微粒，為填充有發光物質的、表面帶有官能團的高分子微粒或者二氧化硅
微粒；
高分子微粒的官能團或者二氧化硅微粒的官能團與鼠抗γ-干擾素單克隆抗體共價聯
接；
所述高分子微粒選自聚苯乙烯微粒或脲醛樹脂微粒；所述的發光物質為鑭系稀土元
素；
所述發光微粒的粒徑為100-400nm，所述的發光微粒的光發射波段為350-820nm；
所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測微粒懸浮液的制備方法，包括如下步驟：
(1)置換發光微粒溶液：
將發光微粒溶液與MES緩沖液混合后，置于溫度為2～8℃的冷凍離心機中，以16000～
20000轉/小時的速度離心5～15分鐘后，收集沉淀物發光微粒，發光微粒溶液與MES緩沖液
的用量比為：0.3-0.5ml發光微粒溶液/ml MES緩沖液；
所述的發光微粒溶液中，發光微粒的含量為：0.1～2g發光微粒/100ml發光微粒溶液；
在所述的沉淀物發光微粒中，再加入微量MES緩沖液，再超聲分散5～15分鐘，獲得清洗
后的發光微粒懸浮液；
MES緩沖液的加入量為：8～12mg發光微粒/mlMES緩沖液；
(2)微粒活化：
在步驟(1)獲得的發光微粒懸浮液中，加入溶解有NHS的MES緩沖液，再加入溶解有EDAC
的MES緩沖液，反應20～40分鐘；MES緩沖液溶解的NHS中，NHS的含量為3～7mg/ml，MES緩沖
液溶解的EDAC中，EDAC的含量為3～7mg/ml；
發光微粒懸浮液與溶解有NHS的MES緩沖液的用量比：2～3ml發光微粒懸浮液/ml溶解
有NHS的MES緩沖液；
發光微粒懸浮液與溶解有EDAC的MES緩沖液的用量比：4～6ml發光微粒懸浮液/ml溶解
有EDAC的MES緩沖液；
(3)然后將步驟(2)的產物置于溫度為2～8℃的冷凍離心機中，以16000～20000轉/小
時的速度離心5～15分鐘后，收集沉淀物，在沉淀物發光微粒中加入MES緩沖液，再超聲分散
5～15分鐘，獲得發光微粒懸浮液；沉淀物發光微粒與MES緩沖液的質量體積比為：1～4mg沉
淀物發光微粒/mlMES緩沖液；
再將發光微粒懸浮液置于溫度為2～8℃的冷凍離心機中，以16000～20000轉/小時的
速度離心5～15分鐘后，收集沉淀物發光微粒，在沉淀物發光微粒中加入MES緩沖液，再超聲
分散5～15分鐘，獲得活化后的發光微粒懸浮液；沉淀物發光微粒與MES緩沖液的質量體積
比為：8～12mg沉淀物發光微粒/mlMES緩沖液；
所述MES緩沖液為嗎啉乙磺酸的水溶液，用NaOH調pH至5.5-6.7，緩沖液終濃度為0.03
～0.07mol/L；
(4)抗體共價：
將鼠抗γ-干擾素單克隆抗體加入到步驟(3)的活化后的發光微粒懸浮液中，反應1～3
小時；
鼠抗γ-干擾素單克隆抗體與步驟(3)的產物中的發光微粒的質量比為0.5～2∶10，鼠
抗γ-干擾素單克隆抗體濃度為1～5mg/ml；
當鼠抗γ-干擾素單克隆抗體濃度大于5mg/ml時，先用MES緩沖液稀釋至1～5mg/ml；
(5)微粒封閉：
在步驟(4)的產物中，加入封閉劑，反應0.5～2小時，反應好后將產物置于溫度為2～8
℃的冷凍離心機中，16000～20000轉/小時的速度，離心5～15分鐘，收集沉淀物；
所述的封閉劑選自含有150-300mg/ml牛血清白蛋白的純水溶液；步驟(4)的產物與封
閉劑的用量比：2-4ml產物：1ml封閉劑；
(6)清洗產物：
在步驟(5)沉淀物中加入磷酸鹽緩沖溶液，再進行超聲分散5～15分鐘，使得發光微粒
重新均勻懸浮于溶液中，再將發光微粒懸浮液置于溫度為2～8℃的冷凍離心機中，16000～
20000轉/小時的速度，離心5～15分鐘，收集沉淀物，為共價聯接了鼠抗γ-干擾素單克隆抗
體的發光微粒；
步驟(5)的沉淀物與磷酸鹽緩沖溶液的質量體積比為：1～4mg沉淀物/ml磷酸鹽緩沖溶
液；
(7)稀釋分裝：
將保存液加入步驟(6)中的沉淀物，超聲分散5～15分鐘，使得發光微粒重新均勻懸浮
于溶液中，并稀釋，即為所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測微粒懸浮液。
2.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，保存液為
一種混合物，以0.01mol/L pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液為載體，含有如下濃度的組分：
聚乙烯吡咯烷酮4～6mg/ml，蔗糖80～120mg/ml，海藻糖20～30mg/ml，牛血清白蛋白50
～150mg/ml，疊氮鈉0.05～0.15mg/ml。
3.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述鑭系
稀土元素為銪、鋱、鈰、鏑或釤。
4.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的結
核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑卡組件，包括檢測試劑卡；
所述檢測試劑卡包括底板(105)、樣品墊(101)、緩沖墊(102)、反應膜(103)和吸水紙
(104)；
所述的反應膜(103)包括反應膜層和劃在上側面的測試線T線和質控線C線，所述的測
試線T線為鼠抗γ-干擾素單克隆抗體，所述的質控C線為羊抗鼠抗體，所述的反應膜(103)
的底側面復合在底板(105)的中部；
所述的吸水紙(104)一端復合在所述的底板(105)的端部，另一端壓在所述的反應膜
(103)的端部上；
所述的緩沖墊(102)是由處理液浸泡過的緩沖墊膜干燥制成；所述的緩沖墊(102)的一
端復合在底板(105)上，并被樣品墊(101)的一端蓋住，另一端壓在反應膜(103)上；
所述的樣品墊(101)是由處理液浸泡過的樣品墊干燥制成，所述的樣品墊(101)的一端
與底板(105)復合，另一端壓在所述的緩沖墊(102)上。
5.根據權利要求4所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢
測試劑卡還包括塑料卡殼，所述的塑料卡殼上表面設有測試孔和信號窗，所述的檢測試劑
卡安置在所述的塑料卡殼中。
6.根據權利要求4所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的結
核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑卡組件，還包括干燥劑和鋁箔袋，所述的鋁箔袋包裹在所
述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑卡和干燥劑外。
7.根據權利要求4所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的反
應膜層為硝酸纖維膜；所述的吸水紙的材質為玻璃纖維和纖維素混合物；所述的緩沖墊膜
為聚酯纖維膜，所述的樣品墊為玻璃纖維膜。
8.根據權利要求4所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，用于所述
的緩沖墊(102)的處理液，為0.1％-1％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮和0.1％-1％(v/v)吐溫20的
純水溶液；所述的處理液與緩沖墊(102)的用量為：0.5-5ml處理液/cm²緩沖墊(102)；
用于所述的樣品墊的處理液為0.1％-1％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮的純水溶液，所述的處
理液與樣品墊的用量比為：0.5-5ml處理液/cm²樣品墊。
9.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的測
試培養管T中的培養液由結核分枝桿菌特異性混合多肽和AIM-V培養基組成，其用量的質量
體積配比為：15～25mg結核分枝桿菌特異性混合多肽/LAIM-V培養基；
所述的結核分枝桿菌特異性混合多肽為ESAT-6蛋白和CFP-10蛋白的多肽片段混合物，
其中ESAT-6蛋白的2個多肽為P52-75aa、P72-95aa，CFP-10蛋白的2個多肽為P76-90aa、P71-
85aa；
所述的ESAT-6蛋白的多肽序列如下：
P52-75aa：awggsgsea yqgvqqkwda atelnnalq nlart
P72-95aa：lartiseag qamastegnv tgmfa
CFP-10蛋白的多肽序列如下：
P76-90aa：irqag vqysradeeq
P71-85aa：eistnirqag vqysr。
10.根據權利要求9所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，4個多肽
用量的質量比為1:1:1:1。
11.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的
本底對照培養管N中的培養液由AIM-V培養基組成，用于測試樣本時作為空白對照。
12.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的
陽性對照培養管P中的培養液由植物凝集素和AIM-V培養基組成，其用量的質量體積配比
為：10～20mg植物凝集素/LAIM-V培養基。
13.根據權利要求1所述的結核T細胞釋放γ-干擾素檢測試劑盒，其特征在于，所述的
γ-干擾素質控品，為高濃度重組人γ-干擾素溶液和低濃度重組人γ-干擾素溶液，所述的
高濃度重組人γ-干擾素溶液，重組人γ-干擾素的含量為100～400pg/mL，所述的低濃度重
組人γ-干擾素溶液，重組人γ-干擾素的含量為25～100pg/mL。