一種大豆分離蛋白酶解產物中的天冬氨酸蛋白酶抑制劑的制備方法，屬于生物制品分離純化技術領域。本發明涉及采用木瓜蛋白酶酶解大豆分離蛋白，得到一種天冬氨酸蛋白酶抑制劑粗品。該粗品繼續采用將酶解液進行熱處理，高速離心，上清液經DEAE-52離子交換層析分離得到天冬氨酸蛋白酶抑制劑，再經真空冷凍干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制劑干粉。本發明所制備的天冬氨酸蛋白酶抑制劑對天冬氨酸蛋白酶家族中胃蛋白酶、凝乳酶有較高的抑制活性，從酶解后的大豆分離蛋白這種天然植物類加工材料中提取的天冬氨酸蛋白酶抑制劑不僅具備特異性較好、穩定性好、且應用相對安全，在醫藥保健、食品添加劑及病蟲害防治等領域都會有廣泛的應用前景。

1.一種大豆分離蛋白酶解產物中的對胃蛋白酶和凝乳酶具有抑制活性的抑制劑干粉的制備方法，其特征為：采用木瓜蛋白酶酶解大豆分離蛋白，將酶解液進行熱處理，高速離心，上清液經DEAE-52離子交換層析得純化的對胃蛋白酶和凝乳酶具有抑制活性的抑制劑，再經真空冷凍干燥得對胃蛋白酶和凝乳酶具有抑制活性的抑制劑干粉；其工藝為：A?篩選酶類優化酶解條件：（1）大豆分離蛋白：市售；（2）酶解：配置質量濃度5%的大豆分離蛋白溶液100?mL，分別用相同酶活單位的木瓜蛋白酶、風味蛋白酶、胰蛋白酶在各自最適溫度、pH條件下酶解相同的時間，研究酶解產物對胃蛋白酶的抑制活性，確定選用木瓜蛋白酶；（3）木瓜蛋白酶酶解大豆分離蛋白：確定木瓜蛋白酶為酶解大豆分離蛋白的最適蛋白酶，酶解條件為：每克大豆分離蛋白加入的木瓜蛋白酶量為8000U，pH?6.5，55℃下水浴酶解60?min；B大豆分離蛋白酶解后上清液的制備：（4）高速離心：將酶解液以8000?r/min、4℃下離心30?min，取上清液；（5）熱處理：將上清液進行70℃下水浴20?min，8000?r/min離心30?min，取上清；C對胃蛋白酶和凝乳酶具有抑制活性的抑制劑干粉的分離制備：（6）離子交換層析：DEAE-52離子交換色譜柱規格為30?cm×2.2?cm，平衡緩沖液為pH?6.8、10?mmol/L的磷酸鈉緩沖液；洗脫模式：以平衡緩沖液洗脫2?倍柱體積后，再以平衡緩沖液依次分別加含有不同濃度?0.2、0.4、0.6、0.8?mol/L?NaCl的磷酸緩沖液進行階段洗脫，流速為1.5?mL/min，進樣量為20?mL，280?nm波長紫外檢測；（7）干燥成粉：采用真空冷凍干燥的方法將DEAE-52?離子交換層析中以含0.2?mol/L?NaCl的磷酸緩沖液梯度洗脫下收集的峰液進行冷凍干燥，即為對胃蛋白酶和凝乳酶具有抑制活性的抑制劑干粉，得到的抑制劑冷凍干粉配成1?mg/mL的溶液，測定其對不同蛋白酶的抑制活性，從酶解大豆分離蛋白液中所產的抑制劑對兩種天冬氨酸蛋白酶族中的胃蛋白酶和凝乳酶均有抑制活性，抑制單位分別為8.3?IU/mL和9.2?IU/mL。