本發(fā)明公開了一種檢測Y染色體微缺失的引物和試劑盒及其使用方法。本發(fā)明所公開的引物為針對6個STS位點和內(nèi)參基因的特異性引物，使用包括有該引物的試劑盒可通過多重PCR擴(kuò)增結(jié)合DHPLC檢測，可以快速、準(zhǔn)確地檢測Y染色體微缺失，檢測程序簡單，檢測靈敏度高，結(jié)果重復(fù)性高，樣品通量高。

1.一種用于檢測Y染色體微缺失的引物，其特征在于，所述引物包括8對引物，可同時擴(kuò)增Y染色體上6個基因位點和兩個內(nèi)參基因；所述Y染色體上6個基因位點為：SY84、SY86、SY127、SY134、SY254和SY255位點；所述兩個內(nèi)參基因為：SRY和TP53基因；特異性擴(kuò)增SY84位點的引物序列如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示，SEQ?ID?NO:15’-AGAGGAGTCCTGATGCAGGT-3’SEQ?ID?NO:25’-GCCCATTACCTGGAGCCTTC-3’特異性擴(kuò)增SY86位點的引物序列如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示，SEQ?ID?NO:35’-GTGAACCACAGACATGCTTC-3’SEQ?ID?NO:45’-ACACACAAGGCGAACCCCT-3’特異性擴(kuò)增SY127位點的引物序列如SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6所示，SEQ?ID?NO:55’-GGCTCTCACACGAATAGAAA-3’SEQ?ID?NO:65’-CTGCTGGCACTAATATGGGA-3’特異性擴(kuò)增SY134位點的引物序列如SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8所示，SEQ?ID?NO:75’-GTCTCGCTCACACTAAAACG-3’SEQ?ID?NO:85’-ACCAACGCCAATACATTCAA-3’特異性擴(kuò)增SY254位點的引物序列如SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10所示，SEQ?ID?NO:95’-GGGTCTATCCAGAGAGCAAA-3’SEQ?ID?NO:105’-GAACCTGATCTAGCAATGCAGC-3’特異性擴(kuò)增SY255位點的引物序列如SEQ?ID?NO:11和SEQ?ID?NO:12所示，SEQ?ID?NO:115’-GTTACGAGATTGCGCGTGAT-3’SEQ?ID?NO:125’-CTCGCTATGTCGAGCCAC-3’特異性擴(kuò)增SRY基因的引物序列如SEQ?ID?NO:13和SEQ?ID?NO:14所示，SEQ?ID?NO:135’-TCGCACCTTCCTTTGTTTTG-3’SEQ?ID?NO:145’-CGTTGTAGGGCGTGAAGT-3’特異性擴(kuò)增TP53基因的引物序列如SEQ?ID?NO:15和SEQ?ID?NO:16所示，SEQ?ID?NO:155’-GGACTCGATTCTCTAACTGC-3’SEQ?ID?NO:165’-GCTTCTGTTCCTCGTTGCTT-3’。2.一種包括有權(quán)利要求1所述的引物的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：1)用于擴(kuò)增Y染色體上SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255位點以及內(nèi)參SRY和TP53基因的引物，引物序列如SEQ?ID?NO:1～SEQ?IDNO:16所示；2)PCR?MIX反應(yīng)液、去離子水、質(zhì)控對照品；3)分隔并集中包裝這些試劑的瓶或管以及包裝盒。3.按照權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述引物的濃度均為10pmol/μl。4.按照權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述PCR?MIX反應(yīng)液包括Taq?DNA聚合酶、dNTPs和MgCl₂；其中，所述Taq?DNA聚合酶的濃度為50U/ml，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，它們的濃度均為400μM，所述MgCl₂的濃度為3mM。5.按照權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述質(zhì)控對照品為正常男性DNA。