一種新的促胰島素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA，Byetalog)生物活性測定方法。它的基本原理是：將GLP-1R和cAMP反應元件(cAMP？response？element，CRE)報告基因載體共轉染CHO-K1細胞，加壓篩選和單克隆分離培養(yǎng)得到穩(wěn)定單克隆細胞株CHOglplr/crec14。GLP-1R與配體結合后，經過一系列信號轉導，激活CRE報告基因螢光素酶的表達，通過檢測Byetalog刺激后螢光素酶表達的變化來對Byetalog活性進行定量。具體檢測步驟為：CHOglplr/crec14細胞6000個/孔鋪96孔板，培養(yǎng)16-18小時，加入不同濃度Byetalog刺激6小時，檢測螢光素酶活性。該方法操作簡單，反應靈敏，變異性小，對于Byetalog的質量控制和臨床應用具有重要意義。

1.一種應用報告基因法檢測促胰島素分泌肽融合蛋白生物活性的方法，其特征在于：
首先，根據GLP-1受體的作用機制和報告基因的原理，構建GLP-1反應性轉基因細胞株，
具體方法是：將GLP-1R載體和cAMP反應元件CRE報告基因載體共轉染CHO-K1細胞，檢測對
Byetalog的反應性，結果顯示，隨著Byetalog濃度的增加螢光素酶活性增強，且劑量反應曲
線關系符合四參數方程，線性較好；
通過200ug／mlG418和300ug／ml潮霉素加壓篩選，進行單克隆分離培養(yǎng)，得到穩(wěn)定克隆
的24個單克隆細胞株，分別檢測對Byetalog反應性，獲得克隆信號值較強，信噪比好，ED₅₀值
最低，檢測靈敏度最高的單克隆細胞株CHOglplr／crec14，再克隆CHOglplr／crec14用于對
Byetalog活性的檢測；
其次，分別對CHOglplr／crec14細胞鋪板密度，藥物作用時間，藥物作用濃度范圍參數
進行優(yōu)化，通過比較ED₅₀值和信噪比，確定如下檢測參數和條件：細胞鋪板密度為6000個細
胞／孔，Byetalog藥物預稀釋濃度為1ug／ml，4倍比稀釋，藥物刺激時間為6h；
第三，檢測步驟與驗證：用RGA法對1批Byetalog原液測定3次，同時做50%回收率，結果
表明，本方法檢測此批原液的比活性均值為4.68×l0⁴U／mg，CV%值為4.14%，回收率在70-
130%之間，重復性和準確性都較高，適用于作為常規(guī)方法來檢測Byetalog活性。