本發(fā)明涉及一種利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，包括如下步驟：(1)將鐮刀菌Fusarium oxysporum ATCC 11711菌株置于種子培養(yǎng)基中，在20～35℃，100-250r/min條件下培養(yǎng)18～30h；(2)將鐮刀菌ATCC 11711種子液以4-10％接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基，并于0～48h內(nèi)加入2.5～20mg·L酪氨酸，除菌后，在20～35℃，100-250r/min條件下培養(yǎng)3～5d；(3)過濾或離心得到的菌絲體置于烘箱中烘至恒重，再經(jīng)丙酮浸泡抽提或超聲波處理離心收集抽提液；(4)利用高效液相色譜和薄層層析分析得到抽提液中冬青生菌素H的濃度。該方法操作簡單、產(chǎn)量穩(wěn)定、可為工業(yè)化生產(chǎn)冬青生菌素H提供新的思路和途徑。

1.一種利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，包括：(1)尖孢鐮刀菌(Fusarium?oxysporum)ATCC?11711菌株的種子培養(yǎng)：將鐮刀菌1～2片1cm直徑的瓊脂培養(yǎng)物置于成分包括2～10g·L^-1葡萄糖，0.2～2.5g·L^-1蛋白胨，0.2～1.5g·L^-1酵母浸膏，0.5～3g·L^-1NaCl的液體種子培養(yǎng)基中，在20～35℃，100-250r/min條件下培養(yǎng)18～30h；(2)尖孢鐮刀菌(Fusarium?oxysporum)ATCC?11711菌株的發(fā)酵培養(yǎng)：以4-10％接種量將鐮刀菌種子液轉(zhuǎn)接至成分包括5～15g·L^-1葡萄糖/蔗糖，0.5～3g·L^-1蛋白胨，0.2～1.5g·L^-1酵母浸膏，1～3g·L^-1NaCl的發(fā)酵培養(yǎng)基，并于0～48h內(nèi)將2.5～20mg·L^-1酪氨酸添加入培養(yǎng)基，100～130℃時(shí)滅菌10～40min后，在20～35℃，100-250r/min條件下培養(yǎng)3～5d；(3)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后通過過濾或離心得到菌絲體，以2～4倍于菌絲體體積的丙酮浸泡菌絲體浸泡抽提過夜，或經(jīng)超聲波處理10～35min后再高速離心收集抽提液；為了獲得菌絲體干重，將菌絲體置于烘箱中烘至恒重后稱重；(4)利用高效液相色譜和薄層層析分析得到抽提液中冬青生菌素H的濃度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(1)所述的種子培養(yǎng)基成分為5g·L^-1葡萄糖、1g·L^-1蛋白胨、0.5g·L^-1酵母浸膏和1g·L^-1NaCl。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(2)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基成分為10g·L^-1葡萄糖/蔗糖、2g·L^-1蛋白胨、1g·L^-1酵母浸膏和2g·L^-1NaCl。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(2)所述的酪氨酸的添加在配制發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)加入，添加量為12.5mg·L^-1。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(3)所述的過濾是利用G₃坩堝進(jìn)行的。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(4)所述的薄層層析是在HSGF254型的預(yù)制硅膠板上點(diǎn)樣，展開劑為乙酸乙脂和石油醚的混合物，v/v＝2∶3，用254nm波長的紫外燈觀察。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：步驟(4)所述的高效液相色譜分析在規(guī)格為150mm×4.60mm，5μm的配備色譜柱Phenomenex?Luna?C18或C8柱的液相色譜儀上進(jìn)行，流動相為乙腈-水緩沖液，v/v＝30∶70，檢測波長為254nm，流速為1.0mL/min。8.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的利用添加酪氨酸提高鐮刀菌合成冬青生菌素H產(chǎn)量的方法，其特征在于：所述的培養(yǎng)鐮刀菌生產(chǎn)冬青生菌素H的過程是間歇式或分批補(bǔ)料式。