本申請涉及檢測靶核酸分子中的突變的方法。相差至少一個堿基的兩個磷酰二胺嗎啉代寡聚物探針各自與納米粒子共價偶聯(lián)并且與靶序列雜交。對所述兩個探針中的每一者與所述靶核酸之間的復(fù)合物的解鏈溫度進行測量并比較以確定樣品是否包含具有所述突變的核酸。另外，本發(fā)明涉及包含如本文所述的第一綴合物和第二綴合物的試劑盒以及此類試劑盒用于檢測靶核酸分子中的突變或用于將基因型指定給靶核酸分子的用途。

1.一種檢測樣品中的靶核酸分子中的突變的方法，其包括以下步驟：(i)使包含第一納米粒子和第一寡核苷酸類似物的第一綴合物與包含靶核酸序列的第一等分試樣在允許所述第一綴合物和所述靶核酸分子彼此雜交的條件下接觸，以形成第一綴合物:靶核酸分子復(fù)合物，其中所述第一寡核苷酸類似物為與所述第一納米粒子共價偶聯(lián)的磷酰二胺嗎啉代寡聚物(PMO)或其衍生物，其中所述第一寡核苷酸類似物包含與所述靶核酸的野生型序列互補的堿基序列；(ii)使包含第二納米粒子和第二寡核苷酸類似物的第二綴合物與包含所述靶核酸序列的所述樣品的第二等分試樣在允許所述第二綴合物和所述靶核酸分子彼此雜交的條件下接觸，以形成第二綴合物:靶核酸分子復(fù)合物，其中所述第二寡核苷酸類似物為與所述第二納米粒子共價偶聯(lián)的磷酰二胺嗎啉代寡聚物(PMO)或其衍生物，其中所述第二寡核苷酸類似物包含堿基序列，所述堿基序列與所述靶核酸的突變序列互補并且與所述第一寡核苷酸類似物的所述堿基序列相差至少一個核堿基，并且其中所述第一寡核苷酸類似物和所述第二寡核苷酸類似物具有至少85％的序列同一性；和(iii)測定步驟(i)和(ii)中的所述樣品的各個等分試樣中形成的所述復(fù)合物的解鏈溫度T_m并通過比較所述復(fù)合物的T_m來檢測所述靶核酸分子是否包含所述突變。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其還包括在步驟(i)之前通過PCR擴增所述靶核酸分子的步驟。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述樣品為異質(zhì)樣品。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中所述靶核酸分子包含SEQ ID No.3、4、13、14、15、16、17或18所示的核苷酸序列。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:1所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:2所示的堿基序列。6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:7所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:8所示的堿基序列。7.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:9所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:10所示的堿基序列。8.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:11所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:12所示的堿基序列。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的方法，其中所述磷酰二胺嗎啉代寡聚物或其衍生物的單體單元由式(I)表示 其中P₁為與另一嘌呤或嘧啶堿基形成沃森-克里克堿基對的嘌呤或嘧啶堿基；并且X為NH₂、NHR或NR₂，其中R為C1-C6烷基。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中與所述P₁的嘌呤或嘧啶堿基形成沃森-克里克堿基對的所述另一嘌呤或嘧啶堿基為核堿基。11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其中X為NR₂并且R為甲基。12.根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一項所述的方法，其中所述嘌呤或嘧啶堿基為選自腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)的核堿基。13.根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一項所述的方法，其中所述嘌呤或嘧啶堿基為選自5-甲基胞嘧啶(m5C)、假尿嘧啶核苷(Ψ)、二氫尿嘧啶核苷(D)、肌苷(I)和7-甲基鳥苷(m7G)、黃嘌呤和次黃嘌呤的核堿基。14.一種試劑盒，其由第一綴合物和第二綴合物組成，或者由第一綴合物、第二綴合物和PCR引物組成，所述第一綴合物包含第一納米粒子和第一寡核苷酸類似物，其中所述第一寡核苷酸類似物為與所述第一納米粒子共價偶聯(lián)的磷酰二胺嗎啉代寡聚物(PMO)或其衍生物，并且所述第二綴合物包含第二納米粒子和第二寡核苷酸類似物，其中所述第二寡核苷酸類似物為與所述第二納米粒子共價偶聯(lián)的磷酰二胺嗎啉代寡聚物(PMO)或其衍生物，其中所述第一寡核苷酸類似物與所述第二寡核苷酸類似物相差至少一個核堿基，并且其中所述第一寡核苷酸類似物與所述第二寡核苷酸類似物具有至少85％的序列同一性，其中所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:1所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:2所示的堿基序列；或所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:7所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQID NO:8所示的堿基序列；或所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:9所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQID NO:10所示的堿基序列；或者所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:11所示的堿基序列，并且所述第二寡核苷酸包含SEQ ID NO:12所示的堿基序列。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中所述第一和/或所述第二納米粒子為金屬納米粒子。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中所述金屬為貴金屬。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中所述貴金屬選自金、銀、鉑、鈀、釕、鋨、銥及其混合物。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的試劑盒，其中所述貴金屬為金。19.根據(jù)權(quán)利要求14至18中任一項所述的試劑盒，其中所述納米粒子的直徑在1nm至100nm的范圍內(nèi)。20.根據(jù)權(quán)利要求14至19中任一項所述的試劑盒，其中所述磷酰二胺嗎啉代寡聚物或其衍生物的單體單元由式(I)表示 其中P₁為與另一嘌呤或嘧啶堿基形成沃森-克里克堿基對的嘌呤或嘧啶堿基；并且X為NH₂、NHR或NR₂，其中R為C1-C6烷基。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的試劑盒，其中與所述P₁的嘌呤或嘧啶堿基形成沃森-克里克堿基對的所述另一嘌呤或嘧啶堿基為核堿基。22.根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的試劑盒，其中X為NR₂并且R為甲基。23.根據(jù)權(quán)利要求20至22中任一項所述的試劑盒，其中所述嘌呤或嘧啶堿基為選自腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)的核堿基。24.根據(jù)權(quán)利要求20至22中任一項所述的試劑盒，其中所述嘌呤或嘧啶堿基為選自5-甲基胞嘧啶(m5C)、假尿嘧啶核苷(Ψ)、二氫尿嘧啶核苷(D)、肌苷(I)和7-甲基鳥苷(m7G)、黃嘌呤和次黃嘌呤的核堿基。25.根據(jù)權(quán)利要求14至24中任一項所述的試劑盒，其中所述第一寡核苷酸類似物和第二寡核苷酸類似物包含15至35個單體單元。26.根據(jù)權(quán)利要求14至25中任一項所述的試劑盒，其中所述至少一種寡核苷酸類似物經(jīng)由官能團與所述納米粒子共價偶聯(lián)。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的試劑盒，其中所述官能團包含硫醇基團。28.根據(jù)權(quán)利要求26或27所述的試劑盒，其中所述官能團為連接分子的一部分。29.根據(jù)權(quán)利要求14至28中任一項所述的試劑盒，其中所述PCR引物由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列組成。30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述PCR引物選自由SEQ ID NO:19和SEQ IDNO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；以及SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24組成的引物對。31.根據(jù)權(quán)利要求14至30中任一項所述的試劑盒，其中所述第一綴合物和所述第二綴合物儲存在各自的容器中。32.根據(jù)權(quán)利要求14至30中任一項所述的試劑盒，其中所述第一綴合物和所述第二綴合物一起儲存在一個容器中。33.根據(jù)權(quán)利要求14至32中任一項所述的試劑盒用于制備用于檢測靶核酸分子中的突變或用于將基因型指定給靶核酸的檢測試劑盒中的用途。