本發明公開了一種用于鑒別羊口瘡病毒和羊痘病毒的二重PCR檢測引物、試劑盒和檢測方法。該方法為羊口瘡病毒和羊痘病毒的診斷提供了一種快速檢測方法，尤其是檢測羊痘病毒的PCR引物涉及了羊痘病毒屬所有成員，包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒及牛疙瘩皮膚病病毒，使得該檢測方法凸顯集成性、高通量性等特點，為羊口瘡病毒和羊痘病毒的診斷、流行病毒調查、防控及治療提供技術支持與幫助。本發明方法具有特異性強、敏感性高、省時省力的優點。

1.一種用于鑒別羊口瘡病毒和羊痘病毒的二重PCR檢測引物，其核苷酸序列如下所示：ORFV-F:CATCATTGCCGTTTACCTCAGA(SEQ ID NO：1)或者CATCATTGCCGTTTACTTCAGA(SEQ ID NO：2)；ORFV-R:TAAGATCYGTGTCGTGTATTCC(SEQ ID NO：3)或者TAAGTTCYGTGTCGTGTATTCC(SEQ ID NO：4)；CaPV-F:CTGGAAGCAAGTGGTAACGGAATA(SEQ ID NO：5)；CaPV-R:AACGATACGAAGGAAATGTGGG(SEQ ID NO：6)。2.一種用于鑒別羊口瘡病毒和羊痘病毒的二重PCR檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒包含權利要求1所述的檢測引物。3.一種用于鑒別羊口瘡病毒和羊痘病毒的二重PCR檢測方法，其特征在于，包括下列步驟：1)從樣品中提取病毒核酸；2)以核酸為模板，用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增反應獲得擴增產物；3)將PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，在凝膠成像系統下觀察結果，確定病毒類型；所述方法不用于疾病的診斷與治療。4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟2)中PCR擴增反應體系為：2×TaqPCR Master Mix 25μL，引物ORFV-F、ORFV-R、CaPV-F和CaPV-R各1μL，病毒核酸模板5-10μL，余量水，總體積為50μL。5.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟2)中PCR反應程序：95℃預變性5min；95℃變性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共計40個循環；72℃終延伸10min。6.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)中在凝膠成像系統下觀察結果，如果僅含有603bp大小的片段，則判定待檢測樣品為羊口瘡病毒；如果僅含有325bp大小的片段，則判定待檢測樣品為羊痘病毒；如果同時含有上述兩種大小的片段，則判定待檢測樣品中既含有羊口瘡病毒，又含有羊痘病毒。