本發(fā)明涉及線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)的引物組合及試劑盒，本發(fā)明利用PCR和Sanger測(cè)序技術(shù)檢測(cè)線(xiàn)粒體全基因組以輔助診斷由于mtDNA突變導(dǎo)致的線(xiàn)粒體病。本發(fā)明先利用6對(duì)特異性引物來(lái)擴(kuò)增整個(gè)線(xiàn)粒體基因組，每個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物大小在2700?3500bp之間，且相鄰的擴(kuò)增片段具有200bp以上的重疊，然后利用21個(gè)測(cè)序引物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序，測(cè)序范圍覆蓋整個(gè)線(xiàn)粒體基因組。利用本發(fā)明的引物組合，只需6個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)和21個(gè)測(cè)序反應(yīng)就能檢測(cè)整個(gè)線(xiàn)粒體基因組，大大減少了檢測(cè)工作量，同時(shí)檢測(cè)成本也大幅減少。

1.線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)的引物組合，包括6組擴(kuò)增引物對(duì)，分別是：用于擴(kuò)增m.14835-m.1691區(qū)域MC1的引物對(duì)，其堿基序列為：MC1-F：GATGAAACTTCGGCTCACTCCTMC1-R：GGGTTTGGGGCTAGGTTTAGC；用于擴(kuò)增m.1216-m.3959區(qū)域MC2的引物對(duì)，其堿基序列為：MC2-F：CGATAAACCCCGATCAACCTCAMC2-R：CCTGCGGCGTATTCGATGTT；用于擴(kuò)增m.3706-m.6808區(qū)域MC3的引物對(duì)，其堿基序列為：MC3-F：CGAGCAGTAGCCCAAACAATCMC3-R：GTGTGTCTACGTCTATTCCTACTG；用于擴(kuò)增m.6418-m.9776區(qū)域MC4的引物對(duì)，其堿基序列為：MC4-F：AACCCCCTGCCATAACCCAMC4-R：TCGGAAATGGTGAAGGGAGA；用于擴(kuò)增的m.8963-m.12214區(qū)域MC5的引物對(duì)，其堿基序列為：MC5-F：ATCAGCCTACTCATTCAACCAAMC5-R：GCTTTCTCGGTAAATAAGGGGT；用于擴(kuò)增m.11965-m.15364區(qū)域MC6的引物對(duì)，其堿基序列為：MC6-F：CACAGCCCTATACTCCCTCTACATMC6-R：GTTTGATCCCGTTTCGTGCAA。2.線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)的擴(kuò)增反應(yīng)體系，所述擴(kuò)增反應(yīng)體系包含6個(gè)單獨(dú)的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中每個(gè)單獨(dú)的擴(kuò)增反應(yīng)體系分別包含權(quán)利要求1引物組合中的一組引物對(duì)、聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液、dNTP和模板DNA。3.根據(jù)權(quán)利要求2的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中所述聚合酶是熱啟動(dòng)Taq酶。4.根據(jù)權(quán)利要求2的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中所述反應(yīng)體系的體積為25μl-50μl。5.線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求1的引物組合。6.權(quán)利要求1的引物組合或權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的擴(kuò)增反應(yīng)體系在制備用于檢測(cè)線(xiàn)粒體全基因組的試劑中的應(yīng)用。7.線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)制備權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的擴(kuò)增反應(yīng)體系；(2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增程序是：在95℃變性5-15分鐘；然后進(jìn)行30-35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)中94℃變性30秒，然后60-65℃退火30-90秒，然后60-72℃延伸60-180秒；最后在60-72℃延伸10-30分鐘；其中所述方法為非診斷目的。8.權(quán)利要求7的線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)方法，還包括步驟(3)：對(duì)擴(kuò)增獲得的序列進(jìn)行測(cè)序。9.權(quán)利要求8的線(xiàn)粒體全基因組檢測(cè)方法，其中所述測(cè)序是Sanger測(cè)序。