本發(fā)明涉及一種檢測農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的高通量多重LDR分型試劑盒，包括：農(nóng)田16種物種的線粒體COI基因通用引物，上游：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；下游：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′；農(nóng)田16種物種的線粒體COI基因的特異探針序列；以及PCR擴增和LDR檢測程序所用試劑。本發(fā)明的試劑盒針對COI基因的通用引物有效擴增出所有目標物種序列，保證了各目標序列以及其中低拷貝的模板可被檢測到；各目標物種的特異探針進一步又保證了特異性，使各目標序列完全區(qū)分出來，實現(xiàn)多重分型定量，從而了解田間捕食結(jié)構(gòu)的變化，維護農(nóng)田生態(tài)環(huán)境。

1.一種檢測農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的高通量多重LDR分型試劑盒，包括：
(一)PCR擴增體系
(1)農(nóng)田16種物種的線粒體CO?I基因通用引物序列：
上游：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；
下游：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′；
(2)PCR擴增體系試劑

(二)多重LDR檢測體系
(1)農(nóng)田16種物種的線粒體CO?I基因的特異探針序列：
擬水狼蛛，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCTCCTGACATATCTTTTCCTCGAATAAA
TAATC；
R：P-TTTCTTTTTGGTTATTACCACCTTCTTTATTTTTATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
TTT-Fam；
擬水狼蛛，產(chǎn)物長度121bp
白背飛虱，LDR探針：
F：TTGGAGCACCTGATATAGCTTTCCCCCGAATAAAC；
R：P-AATATAAGATTTTGGTTACTTCCACCCTCCTTAAT-Fam；
白背飛虱，產(chǎn)物長度70bp
大螟，LDR探針：
F：TTTTTTAGGAGCTATTAATTTTATTACAACAATTATC；
R：P-AATATACGACTAAATAATTTATCTTTTGATCAAATT-Fam；
大螟，產(chǎn)物長度73bp
稻沼蠅，LDR探針：
F：TTTTTTCAGCTCTTTTACTACTTTTATCATTACCTGTTCTC；
R：P-GCTGGAGCCATTACTATGCTTCTTACGGATCGAAATTTTTT-Fam；
稻沼蠅，產(chǎn)物長度82bp
稻縱卷葉螟，LDR探針：
F：TTTTTTTTCTATTATAATTGGAGGATTTGGAAATTGATTAGTG；
R：P-CCTTTAATATTAGGAGCCCCTGATATAGCTTTTCCTTTTTTT-Fam；
稻縱卷葉螟，產(chǎn)物長度85bp
稻縱卷葉螟絨繭蜂，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTGCCTTTATTATAATTTTTTTTATAGTTATACCAG；
R：P-TAATAATTGGAGGATTTGGAAATTGATTAATTCCATTTTTTTTT-Fam；
稻縱卷葉螟絨繭蜂，產(chǎn)物長度88bp
桿蠅，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTGATTATTACCTCCTTCATTAACTTTATTAATG；
R：P-GCTAGAAGTATAGTAGAAAATGGAGCTGGAACTGGTTTTTTTTTT-Fam；
桿蠅，產(chǎn)物長度91bp
褐飛虱，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTCAGGATTTATAGGAACCATAAGTAGTATAATTATC；
R：P-CGATCAGAATTAACTCAACCAGGATCTCTAATTAATTTTTTTTTTTT-Fam；
褐飛虱，產(chǎn)物長度94bp
黑肩綠盲蝽，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTATCACATAATGGAAGATCAGTAGATTTAGCAATC；
R：P-TTCTCACTTCACTTAGCTGGTATTTCATCAATTTTTTTTTTTTTTTTT-Fam；
黑肩綠盲蝽，產(chǎn)物長度97bp
黑尾葉蟬，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTACTTTTAATAAGATCTATCATTGAAATAGGAGTG；
R：P-GGAACAGGTTGAACAGTATACCCCCCCCTTTCAAGTTTTTTTTTTTTTTT-Fam；
黑尾葉蟬，產(chǎn)物長度100bp
灰飛虱，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCTGGAGTTAGATCTATTATAGGAGCTATCAAC；
R：P-TTCATTTCTACAATTATTAATATACGATCAAAAAATTTTTTTTTTTTTTTT-Fam；
灰飛虱，產(chǎn)物長度103bp
搖蚊，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTCTAGAAGTATAGTAGAAAATGGAGCAGGAACAGGG；
R：P-TGAACTGTTTATCCTCCACTTTCATCTGGAATTGCTTTTTTTTTTTTTTTTTT-Fa
m；
搖蚊，產(chǎn)物長度106bp
薊馬，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATCGAAATTTGAACACTTCATTTTTTGATCCAAG；
R：P-AGGAGGAGGGGATCCAGTACTTTACCAACACTTATTTTTTTTTTTTTTTTTT-
Fam；
薊馬，產(chǎn)物長度109bp
水蠅，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCTCCTG；
R：P-CATTAACTTATTTTATAGTAAGCAGTATAGTTGATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT；
水蠅，產(chǎn)物長度112bp
蚜蟲，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACAATTCATGCTTTTATTATAATTTTTTTTATAA；
R：P-CTATACCAATTGTTATTGGTGGTTTTGGAAATTGATTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
TT-Fam；
蚜蟲，產(chǎn)物長度115bp
二化螟，LDR探針：
F：TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATCTTTAATTGGGGATGATCAAATTTATAATAC
C；
R：P-ATTGTTACAGCTCATGCATTTATTATAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
TT-Fam；
二化螟，產(chǎn)物長度118bp；
(2)LDR檢測體系試劑


2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的高通量多重LDR分型試劑盒，其特征
在于：所述的1×Taq?DNA連接酶緩沖液具體組分為：20mM?pH?7.6Tris-HCl，25mM?KAc，10
mM?Mg(Ac)2，10mM?DTT，1mM?NAD和0.1％Triton?X100，緩沖液冷凍貯存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測農(nóng)田生態(tài)環(huán)境的高通量多重LDR分型試劑盒，其特征
在于：所述的混合探針的方案為將16個物種的特異探針以等濃度混合。