本發明涉及一種SPF小鼠病原菌核酸熒光定量PCR聯合快速檢測試劑盒及檢測方法。目的是提供的檢測試劑盒應可同時對四種常見SPF動物攜帶病原進行檢測；提供的方法具有操作簡單、檢測快速的特點。技術方案是：一種SPF小鼠病原菌核酸熒光定量PCR聯合快速檢測試劑盒，包括實時熒光定量PCR預混體系以及ddHO，該試劑盒還包括針對4種病原菌的4對特異性引物；特異性引物如下：金黃色葡萄球菌；肺炎克雷伯菌；沙門氏菌；綠膿桿菌。一種SPF小鼠病原菌核酸熒光定量PCR聯合快速檢測方法，按以下步驟進行：（1）提取樣品DNA；（2）以樣品DNA為模板，進行聯合PCR檢測；（3）反應產物置于定量PCR儀進行熒光檢測。

1.一種SPF小鼠病原菌核酸熒光定量PCR聯合快速檢測試劑盒，包括實
時熒光定量PCR預混體系以及ddH₂O；其特征在于該試劑盒還包括針對4種病
原菌的4對特異性引物；所述特異性引物序列如下：
沙門氏菌：
上游引物-FP:5’-CAACGTATATCTGAAGTTTTGCAGC-3’；
下游引物-RP:5’-TAATGACATCTTTTTCTCTTGGCG-3’；
肺炎克雷伯菌：
上游引物-FP:5’-ATGTCGATTTGGAGGTTGTGCCCTT-3’；
下游引物-RP:5’-CCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTA-3’；
金黃色葡萄球菌：
上游引物-FP:5’-CGAAAGGGCAATACGCAAAGAGGTT-3’；
下游引物-RP:5’-TACGCCGTTATCTGTTTGTGATGCA-3’；
綠膿桿菌：
上游引物-FP:5’-TCAAGCCCACGGTCATCAGCCATCG-3’；
下游引物-RP:5’-GCCGCACTGCTCCAGTTGTTCCCAG-3’。
2.根據權利要求1所述的一種SPF小鼠病原菌核酸熒光定量PCR聯合快
速檢測試劑盒，其特征在于：所述熒光定量PCR預混體系的濃度為2×。