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血吸蟲蟲卵檢測方法及該方法所用的試劑盒和引物

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-06-20
  • 技術(shù)成熟度:詳情咨詢
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201710463669.8 
  • 技術(shù)(專利)名稱 血吸蟲蟲卵檢測方法及該方法所用的試劑盒和引物 
  • 項(xiàng)目單位 南京市疾病預(yù)防控制中心
  • 發(fā)明人 張洪英,楊佩才,謝國祥 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術(shù)成熟度 詳情咨詢
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 許維海
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-06-21  
  • 01

    項(xiàng)目簡介

    本發(fā)明涉及寄生蟲病傳播媒介檢測領(lǐng)域,具體而言,涉及一種血吸蟲蟲卵檢測方法及該方法所用的試劑盒和引物。所述試劑盒包括LAMP引物組、反應(yīng)混合液以及DNA聚合酶;所述反應(yīng)混合液中含有羥基萘酚藍(lán)作為指示劑。所述LAMP引物組包括F3和B3組成外引物對和FIP和BIP組成的內(nèi)引物對;還包括一條LF環(huán)引物。利用該檢測方法的試劑盒可以有效、快速、高特異地對血吸蟲蟲卵進(jìn)行檢測。
    展開
  • 02

    說明書

    1.用于檢測血吸蟲蟲卵的LAMP引物組,其特征在于,所述LAMP引物組包括F3和B3組成外引物對和FIP和BIP組成的內(nèi)引物對以及LF環(huán)引物;所述F3、B3、FIP以及BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO: 1~4所示;所述LF環(huán)引物的核苷酸序列如SEQ ID NO: 5所示。2.一種用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述的LAMP引物組、反應(yīng)混合液以及DNA聚合酶和指示劑;所述指示劑選自碘化丙啶、鈣黃綠素或羥基萘酚藍(lán)中的一種。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述指示劑為羥基萘酚藍(lán),且所述羥基萘酚藍(lán)加入所述反應(yīng)混合液中,濃度為100μM~140μM。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述反應(yīng)混合液包括如下成分:pH為8.6~9.0的15mM~25mM Tris–HCl、1.2mM~1.6mM dNTPs、8mM~12mM KCl、8mM~12mM(NH4)2SO4、6mM~10mM MgSO4、0.6M~1.0M甜菜堿以及體積百分?jǐn)?shù)為0.07%~0.13%的Tween 20。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述DNA聚合酶為具有鏈置換作用的Bst DNA聚合酶,活性單位為14~18U/μL。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括去離子水。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測血吸蟲蟲卵的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)血吸蟲DNA的陽性對照。8.一種用于非疾病診斷目的的血吸蟲蟲卵的檢測方法,其特征在于,包括:提取待檢測的血吸蟲蟲卵DNA,添加權(quán)利要求3~5任一項(xiàng)所述的試劑盒中的試劑組成反應(yīng)體系進(jìn)行恒溫反應(yīng);反應(yīng)過程中或反應(yīng)后觀察反應(yīng)液中指示劑的顏色變化。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中,F(xiàn)3、B3、FIP、BIP以及LF的摩爾比為1:1:(7~9):(7~9):(3~5)。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法,其特征在于,所述恒溫反應(yīng)的條件為:60℃~65℃恒溫反應(yīng)60min~80min。
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