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心肌分化試劑盒及心肌細胞的培養方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-11
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610710491.8 
  • 技術(專利)名稱 心肌分化試劑盒及心肌細胞的培養方法 
  • 項目單位 北京賽貝生物技術有限公司
  • 發明人 魯文靜,蘭峰 
  • 行業類別 醫藥制造-化學藥品制劑
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 秦文斌
  • 發布時間 2021-07-11  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了一種心肌分化試劑盒及心肌細胞的培養方法。該心肌分化試劑盒包括心肌分化基礎培養基、心肌分化添加劑1、心肌分化添加劑2以及心肌分化添加劑3;其中,心肌分化基礎培養基為含糖1640培養基,心肌分化添加劑1包括1~3v%的B27、8~12ng/ml的BMP4以及4~8μM的CHIR99021;心肌分化添加劑2包括1~3v%的B27以及4~6μM的IWP2;心肌分化添加劑3包括1~3v%的B27。該試劑盒中不含動物源成分,分化的心肌細胞均一性好,電生理穩定,可重復性高;適用于包括藥物開發和安全性評價在內的各種需求,為心血管藥物開發和生理學研究奠定基礎。
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  • 02

    說明書

    1.一種心肌分化試劑盒,其特征在于,所述心肌分化試劑盒包括心肌分化基礎培養基、心肌分化添加劑1、心肌分化添加劑2以及心肌分化添加劑3;其中,所述心肌分化基礎培養基為含糖1640培養基,所述心肌分化添加劑1由2v%的B27、10ng/ml的BMP4以及6μM的CHIR99021組成;所述心肌分化添加劑2由2v%的B27以及2 5μM的IWP2組成;所述心肌分化添加劑3由2v%的B27組成;所述心肌分化試劑盒還包括心肌純化基礎培養基及心肌純化添加劑;其中,所述心肌純化基礎培養基為無糖1640培養基;所述心肌純化添加劑由2v%的B27以及2mg/ml的乳糖組成。2.根據權利要求1所述的心肌分化試劑盒,其特征在于,所述心肌分化基礎培養基和所述心肌純化基礎培養基保存在4~8℃,所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2、所述心肌分化添加劑3以及所述心肌純化添加劑分別置于-20~-80℃保存。3.根據權利要求2所述的心肌分化試劑盒,其特征在于,所述心肌分化試劑盒在使用前需配制成相應心肌分化培養基和心肌純化培養基,所述配制成相應心肌分化培養基和心肌純化培養基的步驟包括:在2~8℃化凍所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2、所述心肌分化添加劑3及所述心肌純化添加劑;將所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2以及所述心肌分化添加劑3分別與所述心肌分化基礎培養基以1:40~60的體積比混合后形成心肌分化培養基1、心肌分化培養基2以及心肌分化培養基3;將所述心肌純化添加劑與所述心肌純化基礎培養基以1:40~60的體積比混合后形成所述心肌純化培養基。4.根據權利要求2所述的心肌分化試劑盒,其特征在于,將所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2以及所述心肌分化添加劑3分別與所述心肌分化基礎培養基以1:50的體積比混合后形成心肌分化培養基1、心肌分化培養基2以及心肌分化培養基3。5.根據權利要求2所述的心肌分化試劑盒,其特征在于,將所述心肌純化添加劑與所述心肌純化基礎培養基以1:50的體積比混合后形成所述心肌純化培養基。6.一種心肌細胞的培養方法,其特征在于,所述培養方法包括以下步驟:將人多能干細胞接種到鋪有基質膠或玻璃粘連蛋白的培養皿中;所述人多能干細胞為人誘導多能干細胞;向所述培養皿中依次加入心肌分化培養基1培養2~4天,心肌分化培養基3培養1~2天,心肌分化培養基2培養2~3天,得到分化細胞;其中,所述心肌分化培養基1、所述心肌分化培養基2以及所述心肌分化培養基3分別采用如權利要求1至5中任一項所述的心肌分化試劑盒中的心肌分化基礎培養基、以及心肌分化添加劑1、心肌分化添加劑2或心肌分化添加劑3配制而成。7.根據權利要求6所述的培養方法,其特征在于,配制所述心肌分化培養基1、所述心肌分化培養基2以及所述心肌分化培養基3的步驟包括:將所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2以及所述心肌分化添加劑3分別與所述心肌分化基礎培養基以1:40~60的體積比混合后形成心肌分化培養基1、心肌分化培養基2以及心肌分化培養基3。8.根據權利要求7所述的培養方法,其特征在于,將所述心肌分化添加劑1、所述心肌分化添加劑2以及所述心肌分化添加劑3分別與所述心肌分化基礎培養基以1:50的體積比混合后形成心肌分化培養基1、心肌分化培養基2以及心肌分化培養基3。9.根據權利要求6至8中任一項所述的培養方法,其特征在于,在得到所述分化細胞之后,所述培養方法還包括對所述分化細胞進行心肌細胞純化的步驟。10.根據權利要求9所述的培養方法,其特征在于,對所述心肌細胞純化的步驟包括:去除所述心肌分化培養基2,然后向所述培養皿中加入心肌純化培養基,每隔一天換一次所述心肌純化培養基,純化3~4天,獲得純化后的所述心肌細胞;其中,所述心肌純化培養基采用權利要求1至5中任一項所述的心肌分化試劑盒中的心肌純化基礎培養基及心肌純化添加劑配制而成。11.根據權利要求10所述的培養方法,其特征在于,配制所述心肌純化培養基的步驟包括:將所述心肌純化添加劑與所述心肌純化基礎培養基以1:40~60的體積比混合形成所述心肌純化培養基。12.根據權利要求10所述的培養方法,其特征在于,配制所述心肌純化培養基的步驟包括:將所述心肌純化添加劑與所述心肌純化基礎培養基以1:50的體積比混合形成所述心肌純化培養基。13.根據權利要求9所述的培養方法,其特征在于,在獲得純化后的所述心肌細胞之后,所述培養方法還包括維持培養純化后的所述心肌細胞的步驟。14.根據權利要求9所述的培養方法,其特征在于,維持培養純化后的所述心肌細胞的步驟包括:將純化后的所述心肌細胞接種到鋪有基質膠或玻璃粘連蛋白的培養皿中,并向所述培養皿中添加心肌分化培養基3,每隔2天換一次所述心肌分化培養基3,培養60~100天。
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專利技術附圖

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