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一種快速高效分離軟骨細胞的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-16
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610863882.3 
  • 技術(專利)名稱 一種快速高效分離軟骨細胞的方法 
  • 項目單位 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
  • 發明人 陳海佳,葛嘯虎,王一飛,應杰,張維敏 
  • 行業類別 醫藥制造-生物藥品
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 趙土
  • 發布時間 2021-07-16  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及體外組織細胞分離技術領域,具體涉及一種快速高效分離軟骨細胞的方法,通過在消化前期添加人血白蛋白,緩沖其他外源性蛋白酶對Ⅱ型膠原酶的分解作用,保證Ⅱ型膠原酶不受損傷及具有較高的活性;在消化后期進一步添加氨磷汀溶液,對軟骨細胞起到良好的保護作用,有效防止其在消化過程中受到損傷,有利于得到數量更多、活性更高的軟骨原代細胞。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,包括如下步驟:a、獲取軟骨組織樣本;b、將獲取的軟骨組織樣本用加入雙抗的PBS清洗后轉入容器中;c、向軟骨組織樣本中加入少量的Ⅱ型膠原酶溶液,用手術剪將軟骨組織樣本剪碎;d、向軟骨組織樣本中加入一定量Ⅱ型膠原酶溶液,同時加入人血白蛋白,置于37℃搖床上以100~200rpm的轉速消化30-120min;e、向軟骨組織樣本中添加氨磷汀溶液,繼續置于37℃搖床上以100~200rpm的轉速消化2-4h;f、收集消化液,經篩網過濾后,濾液再經離心沉淀后得到軟骨細胞。2.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟a獲取的軟骨組織樣本保存在雙抗的PBS中。3.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟b中對軟骨組織樣本清洗2~3遍后轉入50mL燒杯中。4.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟c具體為:向軟骨組織樣本中加入1~2mL的Ⅱ型膠原酶溶液,用手術剪將軟骨組織樣本剪碎至1mm3。5.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟d中Ⅱ型膠原酶溶液的加入量為軟骨組織樣本體積的5~10倍,人血白蛋白的加入量為軟骨組織樣本和Ⅱ型膠原酶溶液體積之和的0.5~2%。6.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟e中氨磷汀溶液的加入量為軟骨組織樣本和Ⅱ型膠原酶溶液體積之和的2~5%。7.根據權利要求1所述的快速高效分離軟骨細胞的方法,其特征在于,所述步驟f具體為:將收集的消化液經200目的篩網過濾,濾液再經200~400g離心沉淀,得到軟骨細胞。
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