本發明涉及含破傷風毒素抗原蛋白基因的重組載體，用該載體轉化的宿主，利用轉化體生產破傷風毒素抗原，以及該抗原蛋白在破傷風疫苗及結合疫苗蛋白載體中的應用。本發明的重組質粒載體含有破傷風毒素抗原蛋白的基因，由破傷風毒素抗原蛋白基因與原核表達載體pET-22b(+)連接構建而成。本發明的轉化體是由所述重組質粒載體轉化大腸桿菌而得。本發明的表達系統對表達破傷風毒素抗原蛋白是高效的，表達量為15％，純化的表達蛋白純度可達96.5％。本發明的破傷風毒素抗原具有較好的免疫原性，其可用于制備破傷風疫苗、結合疫苗的載體蛋白。

1.一種重組質粒載體，由破傷風毒素抗原蛋白的基因與表達載體pET-22b(+)連接構建成，其特征在于破傷風毒素抗原蛋白的基因是來自保藏號為CMCC?64008的破傷風梭狀芽胞桿菌株的破傷風毒素C片段基因。2.一種轉化體，其由如權利要求1所述的重組質粒載體轉化大腸桿菌BL21(DE)而得。3.一種制備破傷風抗原蛋白的方法，包括用如權利要求1所述的重組質粒載體轉化大腸桿菌BL21(DE)，克隆并表達，獲得破傷風毒素抗原蛋白。4.一種制備破傷風抗原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)培養保藏號為CMCC?64008的破傷風梭狀芽胞桿菌株，取培養裂解物作為擴增模板；設計兩端帶有BamH?I和Hind?III酶切位點的引物；通過PCR法進行擴增；純化PCR產物；(2)將第(1)步所得純化的PCR產物與pGEM-T?Easy載體連接，構建重組克隆質粒；所述克隆質粒轉化大腸桿菌BL21(DE)感受態細胞，得到陽性克隆；(3)將內切酶BamH?I、Hind?III酶切處理在目的基因兩側帶有限制性內切酶BamH?I、Hind?III識別位點的所述克隆質粒得到目的基因，與經相同酶切處理的表達載體pET-22b(+)連接，構建重組表達質粒，轉化大腸桿菌BL21(DE)的感受態細胞，得到陽性克隆；表達、獲得重組蛋白破傷風毒素抗原。5.一種破傷風疫苗，其含有按照權利要求3的方法制備的破傷風毒素抗原蛋白。6.一種結合疫苗，其含有按照權利要求3的方法制備的破傷風毒素抗原蛋白作為破傷風抗原蛋白載體。7.一種結合疫苗的蛋白載體，其含有按照權利要求3的方法制備的破傷風毒素抗原蛋白。8.一種破傷風疫苗的制備方法，其包括以下步驟：用如權利要求1所述的重組質粒載體轉化大腸桿菌BL21(DE)，克隆并表達破傷風毒素抗原蛋白，獲得破傷風毒素抗原蛋白。