本發(fā)明提供了一種用于評價轉(zhuǎn)基因水稻對土壤微生物多樣性影響的水稻愈傷組織制備方法。本發(fā)明以C葡萄糖(D-GLUCOSE(U-13C6,99%))作為培養(yǎng)基的碳源，對轉(zhuǎn)基因及非轉(zhuǎn)基因水稻的愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)，通過C穩(wěn)定性同位素豐度檢測確定得到了含一定豐度C的轉(zhuǎn)基因及非轉(zhuǎn)基因水稻愈傷組織。上述水稻愈傷組織可用于快速準(zhǔn)確評價轉(zhuǎn)基因水稻植株降解對土壤微生物多樣性的影響，對研究轉(zhuǎn)基因水稻土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及其生態(tài)安全性評價具有重要意義。

1.一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：1）水稻種子的消毒；2）用NB培養(yǎng)基進(jìn)行水稻種子愈傷的誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)；3）用NBc培養(yǎng)基進(jìn)行水稻愈傷組織的繼代培養(yǎng)；4）檢測水稻愈傷組織中的¹³C豐度；其具體步驟為：1）取成熟的水稻種子，分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%乙醇、0.1%?Tween20、10%?NaClO和無菌水進(jìn)行種子消毒；2）消毒后的種子濾干后接種到NB培養(yǎng)基上，于27-29℃生化培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)10-20天，幼胚生出愈傷組織，去掉幼胚將愈傷組織轉(zhuǎn)接到NB培養(yǎng)基上繼代2-3次，每代培養(yǎng)10-20天；3）選取長勢良好的愈傷組織接種到NBc培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)1-2次，每代培養(yǎng)10-20天；4）挑取用NBc培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)后的愈傷組織，用蒸餾水洗凈愈傷組織上殘留的培養(yǎng)基，然后將愈傷組織烘干磨碎后進(jìn)行¹³C穩(wěn)定性同位素豐度檢測；NBc培養(yǎng)基配方為：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500?mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、¹³C葡萄糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1，pH5.8-5.9；NB培養(yǎng)基配方：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、蔗糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1、pH5.8-5.9。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：通過檢測¹³C豐度確定獲得了含有¹³C的水稻愈傷組織。