本發明是一種生產透明質酸的方法。該方法是通過構建透明質酸合成酶基因和尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶基因在大腸桿菌中共表達的重組表達載體，將該重組表達載體轉化大腸桿菌獲得工程大腸桿菌，發酵該工程大腸桿菌得到透明質酸。該方法提高生產透明質酸的產量達到2.5g/L,比現有技術通過大腸桿菌中表達革蘭氏陽性鏈鎖狀球菌HA合成基因獲得的最高HA產量提高近10倍。

1.一種透明質酸的制備方法，其特征在于用工程大腸桿菌pHK/JM109生產透明質酸的搖瓶培養合成按以下進行：?在500ml-2500ml?三角瓶中，以總體積100ml-500ml?含25-50?mM?K₂HPO₄·3H₂O,?pH6.5-7.2，2-4mM?MgSO₄·7H₂O,?20-40?mM?檸檬酸,?1-2?mM?MnCl₂,?300-400?mM?葡萄糖，50-75?mM?氮乙酰葡萄糖胺,5-10?mM?乳糖，10-30?g/L?甘油，3-5g/L酪蛋白酸水解物的體系中加入已表達pmHas和kfiD的pHK/JM109，使菌體細胞濃度達4-5%?W/V,?發酵條件為30-33?℃，250?rpm，并用28%?V/V的氨水調節pH至中性，發酵反應時間為30-36小時，工程大腸桿菌pHK/JM109?分類命名為大腸埃希氏菌（Escherichia?coli），保藏號為CGMCC?No.3926。2.一種透明質酸的制備方法，其特征在于用工程大腸桿菌pHK/JM109生產透明質酸的發酵罐培養合成按以下進行：從Amp50-100μg/ml+Km25-100μg/ml的LB平板上挑起3-5個經劃線并過夜培養的pHK/JM109單菌落，置于100ml?TB培養基，過夜培養；該培養物經離心收集菌體，菌體用20-50ml?TB懸浮，全部轉入1-5L的發酵罐，發酵罐培養基為TB培養基并含Amp50-?100μg/ml+Km25-100μg/ml，總體積為600-3000?ml，控制溫度37℃，轉速1200?rpm,?通入流量為60?ml/min?的混合氣體，即氧氣：空氣為1：10?v/v，并用28%?V/V氨水及4?mol/L?HCl?調節pH至6.8-7.2?，培養4?小時，當培養物OD₆₀₀達到5時，加入IPTG使其終濃度達0.5-1?mM，同時將反應溫度調節至30-33?℃培養2?小時，此時加入50%?W/V葡萄糖和10%?W/V磷酸銨?pH6.8?，使發酵液中葡萄糖和磷酸銨含量分別為50?g/L和1?g/L,?30?℃培養10?小時后，再次加入IPTG、葡萄糖和磷酸銨使其濃度分別為0.5?mM、50?g/L和1?g/L，混合液30?℃培養14－30小時后完成發酵，得到2-3?g/L濃度的透明質酸，工程大腸桿菌pHK/JM109?分類命名為大腸埃希氏菌（Escherichia?coli），保藏號為CGMCC?No.3926。