本發(fā)明公開了一種利用無機氮源的微藻光合兼養(yǎng)高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法及應(yīng)用。本發(fā)明涉及一種利用無機氮源的微藻高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法，以無機氮鹽為無機氮源、葡萄糖為有機碳源的培養(yǎng)基，進行光合兼養(yǎng)培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)基氮源和碳源消耗及生物量增長情況，分段補加葡萄糖、無機氮鹽和其它營養(yǎng)鹽，合理調(diào)控營養(yǎng)鹽濃度、pH值、通氣量、光強和藻液攪動速度，使微藻短期內(nèi)快速增值，縮短培養(yǎng)時間，保證微藻的高密度生長，實現(xiàn)微藻細(xì)胞生物量快速增長的同時對無機氮的高效吸收同化。本發(fā)明適用于以無機氮鹽為氮源的微藻高密度光合兼養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)，為微藻在環(huán)境生態(tài)應(yīng)用和生物能源生產(chǎn)的經(jīng)濟可行性研究奠定了基礎(chǔ)。

1.一種利用無機氮源的微藻光合兼養(yǎng)高密度發(fā)酵培養(yǎng)方法在工業(yè)煙氣NOx生物脫硝和藻油
制備的聯(lián)合生產(chǎn)中的應(yīng)用；
1).配制微藻培養(yǎng)基：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1LBG11培養(yǎng)基中添加10-60g葡萄糖，無機氮鹽終濃度為1.5-9.0g/L；
補料液1為1L去離子水中含葡萄糖600-800g；
補料液2為1L去離子水中含無機氮鹽50-150g；
補料液3為1L去離子水中含K₂HPO₄·3H₂O40g，檸檬酸鐵銨6g，Na₂CO₃20g；
補料液4為1L去離子水中含MgSO₄·7H₂O75g，CaCl₂·2H₂O36g，檸檬酸6g，EDTA·2Na
1g；
補料液5為A₅溶液；
2).光照生物反應(yīng)器中添加基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)體積為反應(yīng)器體積的50％-80％，將微藻細(xì)
胞接種于光照生物反應(yīng)器中，接種密度為1.0×10⁷-2.0×10⁷cells/mL，加入0.1％-0.5％v/v有
機硅消泡劑和0.01-0.05g/L氯霉素阻止泡沫產(chǎn)生和雜菌污染，平均光強為200-400μmolm^-2
s^-1，培養(yǎng)溫度為20-30℃，pH6.0-8.5，通入氣體為壓縮空氣，每L培養(yǎng)基通氣量為0.5-2.0L/min，
初始轉(zhuǎn)速200rpm，當(dāng)培養(yǎng)規(guī)模≤10L，微藻生物量≥15.0×10⁷cells/mL或培養(yǎng)規(guī)模＞10
L，微藻生物量≥20.0×10⁷cells/mL時，生物量每增長1倍攪拌速度提高50-100rpm，最高
維持在400-500rpm；
3).在微藻光合兼養(yǎng)高密度發(fā)酵培養(yǎng)過程中，每24小時根據(jù)葡萄糖與無機氮鹽消耗情
況進行補料液1和補料液2的補料，使培養(yǎng)液中葡萄糖濃度為10-30g/L，C/N維持在5-10；
每24小時根據(jù)微藻生物量增長情況進行營養(yǎng)鹽補料，生物量的增長量為3.0×10⁷-4.5×10⁷
cells/mL時，補充補料液33mL/L，補料液44mL/L，補料液51mL/L各一次，每24小時只
補料一次；
4).生物量增長至60.0×10⁷-80.0×10⁷cells/mL時，停止進行補料液2的補料，替換為補加
工業(yè)煙氣NOx固定鹽溶液，使培養(yǎng)液NaNO₂含量至15-30g/L，每24小時根據(jù)消耗情況進
行補料使NaNO₂維持在15-30g/L；隨后每24小時根據(jù)葡萄糖消耗情況進行補料液1的補
料，使培養(yǎng)液中葡萄糖濃度為10-30g/L；根據(jù)微藻生物量增長情況進行營養(yǎng)鹽補料，生物
量的增長量為3.0×10⁷-4.5×10⁷cells/mL時，補充補料液33mL/L，補料液44mL/L，補料
液51mL/L各一次，每24小時只補料一次；生物量增長進入穩(wěn)定期后停止發(fā)酵，收集藻液，
提取藻油。