本發(fā)明公開(kāi)一種模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其包括將骨頭破碎成骨塊，蒸煮后干燥粉碎，加入蒸餾水調(diào)配至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20～30％；調(diào)節(jié)pH值至3.0～5.0，加入木瓜蛋白酶和還原劑，輔以超聲波和微波進(jìn)行預(yù)酶解；調(diào)節(jié)pH值至1.0～4.0，加入胃蛋白酶并輔以超聲波進(jìn)行一次酶解；調(diào)節(jié)pH值至7.0～8.5，加入糜蛋白酶與胰蛋白酶的混合酶，輔以超聲波進(jìn)行二次酶解；進(jìn)行脫鹽處理；收集多肽液進(jìn)行噴霧干燥，得到蛋白小分子肽。本發(fā)明基于模擬人體消化道中主要的消化蛋白酶類(lèi)的酶解程序，經(jīng)預(yù)酶解及一次、二次酶解，并輔以超聲波?微波，酶解出便于人體直接吸收和利用的蛋白小分子肽類(lèi)產(chǎn)品。

1.一種模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，其制備方法包括以下步驟：步驟1，將已洗凈的新鮮動(dòng)物骨頭破碎成骨塊，經(jīng)由沸水蒸煮后，取骨塊干燥粉碎后得干燥骨粉，加入蒸餾水調(diào)配至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20~30%的骨泥液；步驟2，調(diào)節(jié)所述骨泥液的pH值至3.0~5.0，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.5%加入木瓜蛋白酶和還原劑，在30~40℃下，輔以功率為200W的微波輻照，同時(shí)輔以功率為100~300W、頻率為40~60kHz的超聲波進(jìn)行預(yù)酶解，得到預(yù)酶解液，其中所述木瓜蛋白酶的酶活力為80萬(wàn)U/g；步驟3，將步驟2制得的所述預(yù)酶解液過(guò)濾、離心得到粗蛋白水解液；步驟4，調(diào)節(jié)所述粗蛋白水解液的pH值至1.0~4.0，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.1%~0.2%加入胃蛋白酶，并在40~50℃下輔以功率為100~300W，頻率為40~60kHz的超聲波進(jìn)行一次酶解，得到一次酶解液；然后調(diào)節(jié)所述一次酶解液的pH值至7.0~8.5，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.1%~0.2%加入糜蛋白酶與胰蛋白酶的混合酶，在30~40℃下輔以功率為100~300W，頻率為40~60kHz的超聲波進(jìn)行二次酶解；待完成二次酶解后，調(diào)節(jié)pH值至中性得到二次酶解液，其中所述胃蛋白酶、糜蛋白酶與胰蛋白酶的酶活力均為20萬(wàn)U/g，所述糜蛋白酶與胰蛋白酶的質(zhì)量比為1：1，超聲波每工作10s間歇停止20s~40s；步驟5，采用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和弱堿型陰離子交換樹(shù)脂組成的混合床對(duì)所述二次酶解液進(jìn)行脫鹽處理，得到脫鹽水解液；步驟6，將所述脫鹽水解液經(jīng)超濾膜進(jìn)行截留分離，收集分子量1kDa以下的多肽液進(jìn)行噴霧干燥，得到蛋白小分子肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟2的具體步驟包括：步驟2-1，調(diào)節(jié)所述骨泥液的pH值至3.0~5.0，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.5%加入木瓜蛋白酶，同時(shí)加入還原劑，其中木瓜蛋白酶與還原劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比為1：0.2~1；步驟2-2，在30~40℃下，輔以功率為200W的微波輻照5min，同時(shí)輔以功率為100~300W、頻率為40~60kHz的超聲波對(duì)所述骨泥液預(yù)酶解20~40min，得到預(yù)酶解液，其中超聲波每工作10s間歇停止20s~40s。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟4的具體步驟包括：步驟4-1，調(diào)節(jié)所述粗蛋白水解液的pH值至1.0~4.0，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.1%~0.2%加入胃蛋白酶，在40~50℃下輔以超聲波酶解30~50min，得到一次酶解液；步驟4-2，調(diào)節(jié)所述一次酶解液的pH值至7.0~8.5，按所述干燥骨粉質(zhì)量的0.1%~0.2%加入糜蛋白酶與胰蛋白酶的混合酶，在30~40℃下輔以超聲波酶解30~50min，得到二次酶解液，其中糜蛋白酶與胰蛋白酶的質(zhì)量比為1：1；步驟4-3，待完成二次酶解后，在90℃下滅酶10min，并調(diào)節(jié)pH值至中性得到二次酶解液。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟2-1中的所述還原劑為抗壞血酸或異抗壞血酸，且按每10萬(wàn)U酶活力的所述木瓜蛋白酶計(jì)，還原劑的添加量為25mg~125mg。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟1的具體步驟包括：步驟1-1，將已洗凈的新鮮動(dòng)物骨頭破碎成骨塊，按1:2~3的料液比加入沸水蒸煮40-80min；步驟1-2，去除蒸煮液表層油脂后，將骨塊瀝干并在80~90℃下干燥至含水量小于5%；步驟1-3，將所述步驟1-2干燥的骨塊依次進(jìn)行粗粉碎、超微粉碎至粒徑小于200目得到干燥骨粉；步驟1-4，取所述步驟1-3的干燥骨粉，加入蒸餾水調(diào)配至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20~30%的骨泥液。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟6的具體步驟包括：將所述脫鹽水解液經(jīng)以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20min，取上層離心清液并由超濾膜進(jìn)行截留分離，收集分子量1kDa以下的多肽液進(jìn)行噴霧干燥，得到蛋白小分子肽。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的模擬人體消化道酶解制備蛋白小分子肽的方法，其特征在于，所述步驟6中的噴霧干燥條件為：進(jìn)口溫度180℃、出口溫度120℃。