1.一種小鼠脂聯素基因超表達載體的構建方法,其特征在于,通過以下步驟實現:(1)提取正常ICR雄性小鼠白色脂肪組織中的RNA,反轉錄為cDNA,得到小鼠脂聯素?DNA片段,序列如SEQ?ID?NO:1所示;(2)RT-PCR?擴增:以(1)得到的cDNA為模板,上下游引物為,SEQ?ID?NO:2??5'-ATGCTACTGTTGCAAGCTCT-3'?SEQ?ID?NO:3??5'-TCAGTTGGTATCATGGTAGA-3'用pfu?DNA聚合酶進行PCR反應,擴增條件為93℃、3分鐘預變性后,94℃50?秒、56℃45秒-2分鐘、72℃30秒共30個循環,最后1輪循環完成后再72℃延伸10?分鐘,反應完畢后,用1%瓊脂糖凝膠電泳檢查擴增結果;(3)表達載體構建:將回收的目的DNA片段連至pTarget載體,轉化大腸桿菌-TOP10感受態細胞中,涂布含100mg/mL氨芐西林的LB平板上,過夜培養,挑取單菌落至含有同樣濃度Amp的液體培養液中,抽提質粒,用EcoRI酶切質粒,1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。2.根據權利要求1所述方法構建的一種小鼠脂聯素基因超表達載體在制備治療肥胖及代謝性綜合癥藥物中的應用。3.?根據權利要求1所述方法構建的一種小鼠脂聯素基因超表達載體在建立動物模型進行脂聯素對糖和脂肪代謝的調節及肌纖維生長?、發育的影響研究中的應用。4.根據權利要求2或3所述的應用,其特征在于,所述用途通過以下步驟實現:(1)將含小鼠脂聯素超表達載體的大腸桿菌擴大培養后,利用去內毒素試劑盒提取高純轉染級質粒;(2)將含小鼠脂聯素超表達載體的高純轉染級質粒進行小鼠體內流體效應法超表達實驗,流體效應法參數為:質粒15ug,尾靜脈注射超表達載體體積:0.1ml/體重,時間為10秒;(3)小鼠尾靜脈注射超表達載體,1天后,分析pTarget/脂聯素超表達載體對脂肪代謝關鍵功能基因ATGL、HSL、LPL、SIRT1、PGC-1α、FOXO3a基因表達的影響,1周后,同樣分析對脂肪和肌肉上述脂肪代謝關鍵功能基因ATGL、HSL、LPL、SIRT1、PGC-1α、FOXO3a,以及肌肉中肌纖維分型MyHCI、MyHCIIa、MyHCIIb、MyHCIIx基因表達的影響,研究脂聯素的功能。
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