本發(fā)明涉及一種豬口蹄疫苗用的、由CpG基序和豬IFN-γ基因克隆入真核表達載體構(gòu)成的佐劑及其制造方法，以及豬口蹄疫病毒滅活抗原疫苗與這種佐劑配伍而成豬口蹄疫苗組合物。本發(fā)明的這種復合分子型佐劑，其CpG基序為至少由3個GTCGTT、2個GACGTT和1個AACGTT特殊序列構(gòu)成的一段基序，其序列為SEQ No：1，用其構(gòu)建的PcDNA3.1重組質(zhì)粒，并在大腸桿菌中增殖。

1.一種豬口蹄疫苗用的復合分子型佐劑，其特征在于這種佐劑是由CpG基序和豬IFN-γ基因克隆入真核表達載體構(gòu)成的重組質(zhì)粒，其中CpG基序和豬IFN-γ基因序列如SEQ?No：4所示。?2.一種制備權(quán)利要求1所述的一種豬口蹄疫苗用的復合分子型佐劑的方法，其特征在于人工設計、合成一段基本骨架由3個GTCGTT、2個GACGTT和1個AACGTT所構(gòu)成的CpG基序以及其配對序列，同時在其末端分別設計EcoRI和Xho1酶切位點的部分堿基，并使其成為雙鏈DNA，其序列如SEQ?NO：1所示，通過基因重組方法構(gòu)建到經(jīng)EcoRI和Xho1酶切的真核表達載體pcDNA3.1中，獲得含CpG基序的pcDNA3.1-CpG重組質(zhì)粒；然后以pGEM-T?easy-pIFN-γ重組質(zhì)粒為模板，利用豬IFN-γ特異的上游引物：CCCAAGCTTACAATGGGTTATACAACTACTTATTTCT?Hind?III和下游引物：GGAATTCTTATTTTGATGCTCTCTGGCCT?EcoRI擴增獲得其基因，再分別將含CpG基序的pcDNA3.1-CpG重組質(zhì)粒和IFN-γ基因經(jīng)相應的酶酶切后連接，得到含SEQ?No：4的pIFN-γ-CpG?DNA重組質(zhì)粒。?3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于構(gòu)建的pIFN-γ-CpG?DNA重組質(zhì)粒，先轉(zhuǎn)化大腸桿菌，用氨芐青霉素抗性篩選陽性克隆，提取重組質(zhì)粒測序鑒定后，選擇高拷貝的陽性菌株，接種到含氨芐的LB培養(yǎng)基中大量增殖，擴增pIFN-γ-CpG?DNA重組質(zhì)粒，用SDS堿裂解法大量提取重組質(zhì)粒DNA。?4.一種豬口蹄疫苗組合物，其特征在于豬口蹄疫病毒滅活抗原疫苗與權(quán)利要求1所述的分子型佐劑配伍而成。?