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一種microRNA檢測探針和檢測microRNA的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-15
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310126387.0 
  • 技術(專利)名稱 一種microRNA檢測探針和檢測microRNA的方法 
  • 項目單位 武漢大學
  • 發明人 周翔,彭雙,王少儒,田沺,翁小成 
  • 行業類別 醫療器械-醫療實驗室
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓嘉穎
  • 發布時間 2021-07-15  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種microRNA檢測探針和檢測microRNA的方法。檢測探針,由三部分組成,中間區域為與靶標microRNA互補的單鏈DNA,所述單鏈DNA的一端連著DNA酶,作為信號輸出部分,所述單鏈DNA另一端為標記上的生物素。待測體系中加入探針,探針的單鏈DNA與標靶microRNA互補配對,DSN選擇性的消化DNA-RNA雜交的DNA鏈,RNA循環使用。加入鏈霉親和素磁珠,通過鐵磁體將磁珠連同未反應生物素標記的探針從水溶液中去除。溶液部分仍然用于進一步的信號輸出反應。本發明的檢查方法采用DSN放大加上核酶放大,是一個低背景高靈敏度特異性強的檢測microRNA方法。
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  • 02

    說明書

    1.?一種microRNA檢測探針,由三部分組成,中間區域為與靶標microRNA互補的的單鏈DNA,所述單鏈DNA的一端連著DNA酶,作為信號輸出部分,所述單鏈DNA另一端為標記上的生物素,其長度為7-10堿基。2.根據權利要求1所述的microRNA檢測探針,其特征在于,所述DNA酶包括DNA過氧化物酶、8-17脫氧核酶或者10-23?脫氧核酶。3.一種非疾病診斷目的檢測microRNA的方法,其特征在于,包括如下步驟:1)根據待測靶標microRNA設計合成權利要求1所述的檢測探針;2)向待測體系中加入探針,濃度為100nM,探針中的單鏈DNA與?標靶microRNA以堿基配對結合,再向待測體系中加入雙鏈特異性核酸酶,59攝氏度反應30分鐘,切斷結合的探針,使之分為兩部分,一部分是生物素標記的單鏈DNA,另一部分是DNA酶;3)將鏈霉親和素磁珠加入到待測體系中,37攝氏度孵育30分鐘,通過鐵磁體將磁珠連同未反應的探針和切斷的生物素標記的單鏈DNA從水溶液中去除,室溫作用;4)含有DNA酶部分的水溶液孵育后,加入底物,通過檢查動力學來檢測相應靶標microRNA。4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,在待測體系中,雙鏈特異性核酸酶用量為0.2?U。5.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,探針連接的DNA酶是DNA過氧化物酶,含有DNA酶部分的水溶液在含有氯高鐵血紅素和10?mM鉀離子的溶液中孵育。6.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,探針連接的DNA酶是8-17脫氧核酶,含有DNA酶部分的水溶液在含5mM鎂離子的Tris-HCl緩沖液孵育。7.根據權利要求3所述的檢測方法,其特征在于,待測靶標microRNA為miR141或miR429。8.含有權利要求1所述microRNA檢測探針的試劑盒。
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