本發明屬于流行病學和衛生檢測領域。本發明涉及一種快速檢測馬鏈球菌獸疫亞種的PCR快速檢測試劑盒及方法。具體而言，本發明所述試劑盒包括三對引物，分別特異性地針對類M蛋白(SzP)、纖聯蛋白結合蛋白(Fnz)超氧化物歧化酶A(SodA)編碼基因，可同時針對馬鏈球菌獸疫亞種的三種毒力因子SzP、Fnz和SodA進行檢測。本發明所述的多重PCR檢測方法快速簡便，可直接對病料檢測，避免了常規細菌分離、培養和生化鑒定的復雜過程，縮短了檢測時間，且操作方便，簡單培訓即能熟練使用。敏感性高，能檢測出微量的病原。特異性強，能將馬鏈球菌獸疫亞種和其它種類的鏈球菌區別開來，且無任何交叉反應。

1.一種用于檢測馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcus?equi?subsp.zooepidemicus)的多重PCR檢測試劑，該試劑包括分別特異性地針對馬鏈球菌獸疫亞種的類M蛋白(SzP)、纖聯蛋白結合蛋白(Fnz)和超氧化物歧化酶A(SodA)編碼基因的三對引物，其中所述的特異性地針對類M蛋白編碼基因的引物對的核苷酸序列為：正向引物：5’CTA?TCG?GTG?GTC?GTA?ATG?GAG?A3’反向引物：5’ACC?TGC?CAT?AAC?TGC?AAG?AGC?T3’其中所述的特異性地針對纖聯蛋白結合蛋白編碼基因的引物對的核苷酸序列為：正向引物：5’GAG?GTG?GAC?CAG?CTT?CAC?CT?3’反向引物：5’GAG?GAA?AGA?CGG?TCC?AGA?CG?3’其中所述的特異性地針對超氧化物歧化酶A編碼基因的引物對的核苷酸序列為：正向引物：5’CAG?CAT?TCC?TGC?TGA?CAT?TCG?TCA?GG?3’反向引物：5’CTG?ACC?AGC?CTT?ATT?CAC?AAC?CAG?CC?3’。2.權利要求1所述的多重PCR檢測試劑，其中所述的三對引物可以預先混合在一起，也可以獨立存在于所述檢測試劑中，使用時現用現配。3.一種檢測馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測方法，該方法包括下列步驟：1)使用權利要求1或2所述的三對引物，與PCR擴增用的dNTP、MgCl₂、PCR緩沖液及聚合酶混合，得到檢測預混液；2)向上述檢測預混液中加入待檢菌液或從待檢組織提取的基因組DNA作為模板；3)將步驟2)中建立的擴增反應體系置于PCR儀上，按照預定擴增條件進行擴增；4)觀察是否有目標擴增產物出現，其中所述的目標擴增產物出現是指，當電泳檢測時，同時出現750bp、540bp和230bp三個條帶。4.權利要求3所述的檢測馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測方法，其中所述的擴增條件為：94℃變性4min；然后進入循環，94℃?30s，55℃?30s，72℃?30s，共進行25個循環；最后72℃延伸10min。5.權利要求3所述的檢測馬鏈球菌獸疫亞種的非診斷性多重PCR檢測方法，其中所述的電泳為瓊脂糖凝膠電泳或SDS-PAGE電泳。