本發(fā)明公開(kāi)了一種細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)方法、基因芯片和試劑盒。該試劑盒包括擴(kuò)增待測(cè)細(xì)菌耐藥基因的引物對(duì)和檢測(cè)探針。該基因芯片包括檢測(cè)待測(cè)細(xì)菌耐藥基因的探針。利用該試劑盒和基因芯片進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)的方法，包括步驟：1)利用試劑盒中的引物，PCR擴(kuò)增待測(cè)樣本DNA中的耐藥基因；2)擴(kuò)增產(chǎn)物與試劑盒中的檢測(cè)探針進(jìn)行熒光標(biāo)記反應(yīng)；3)熒光標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片進(jìn)行雜交，確定樣本所含耐藥基因。本發(fā)明的檢測(cè)方法覆蓋了臨床最常見(jiàn)的16種耐藥基因的檢測(cè)，有助于實(shí)現(xiàn)臨床細(xì)菌耐藥情況的快速診斷，從而可以為臨床合理選擇治療藥物提供支持。

1.一種細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括擴(kuò)增待測(cè)細(xì)菌耐藥基因的引物對(duì)和
檢測(cè)所述細(xì)菌耐藥基因的探針；所述引物的序列如SEQ?ID?No:1～32所示；所述探針的序列
如SEQ?ID?No:33～61所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述耐藥基因?yàn)镺XA-23、IMP、VIM、
aac(6’)-Ie-aph(2”)-Ia、CTX-M、KPC、CIT、mecA、TEM、SHV、DHA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib、
ParC和GyrA。
3.一種用于細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)的基因芯片，其特征在于：包括檢測(cè)待測(cè)細(xì)菌耐藥基因的
探針，所述探針的序列如SEQ?ID?No:33～61所示。
4.利用權(quán)利要求1或2所述的細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒和權(quán)利要求3所述的用于細(xì)菌耐
藥基因檢測(cè)的基因芯片進(jìn)行非診斷目的的細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)的方法，其特征在于，包括以下
步驟：
1)利用所述試劑盒中的引物，對(duì)待測(cè)樣本DNA中的耐藥基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
2)將步驟1)的產(chǎn)物與所述試劑盒中的檢測(cè)細(xì)菌耐藥基因的探針進(jìn)行熒光標(biāo)記反應(yīng)；
3)將步驟2)的產(chǎn)物與所述基因芯片進(jìn)行雜交反應(yīng)，確定樣本所含的耐藥基因。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)體系為：10×PCR緩沖液
1.0～2.0μL，10mM?dNTP混合液0.1～0.4μL，引物混合物0.8～1.2μL，DNA聚合酶0.1～
0.4μL，樣本DNA0.8～2μL，加滅菌蒸餾水補(bǔ)充至15μL。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述PCR的反應(yīng)條件為：95℃，5分
鐘；95℃，30秒，68℃，30秒，共30個(gè)循環(huán)；68℃，3分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述熒光標(biāo)記反應(yīng)的反應(yīng)體系為：擴(kuò)增產(chǎn)
物2～5μL，10×Buffer1.2～1.8μL，5U/μL?Sequenase?DNA聚合酶0.1～0.3μL，20μM探
針混合物0.1～0.5μL，100mM?Cy3-ddNTP0.1～0.5μL。
8.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的方法，其特征在于，所述熒光標(biāo)記反應(yīng)的反應(yīng)條件為：95℃，
5分鐘；95℃，30秒，65℃，30秒，72℃，20秒，共40個(gè)循環(huán)；72℃，5分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述雜交反應(yīng)的反應(yīng)體系為：熒光標(biāo)記的
擴(kuò)增產(chǎn)物15～25μL，20×SSPE6～15μL，20nmol/L陽(yáng)性質(zhì)控0.1～0.4μL，混合均勻，用滅
菌水補(bǔ)充至30～40μL；反應(yīng)條件為：在95℃下加熱5分鐘，冰上驟冷，然后與所述基因芯片
在48℃下雜交反應(yīng)2小時(shí)。