本發明公開了一種谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，以谷氨酸棒桿菌ATCC13032為生產菌株，好氧富集菌株的同時固定菌株。當菌體生長至對數期末期后，將種子培養基倒掉，加入發酵培養基厭氧發酵生產丁二酸，厭氧發酵過程中利用的CO以NaCO和CO的形式提供。厭氧發酵至葡萄糖含量小于5g/L時，換成新鮮發酵培養基培養。以此方法，可實現至少15批丁二酸的固定化發酵。通過本發明的方法，在不增加設備投入和節省能耗的前提下，菌株固定化后，可反復批次發酵產生丁二酸，節省了種子培養的時間，提高了發酵效率，節省了成本，為丁二酸的工業化生產提供了新的技術支持。

1.谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，其特征在于，以谷氨酸棒
桿菌ATCC13032為生產菌株，先進行好氧富集，再進行厭氧發酵生產丁二酸；
其中，在好氧富集的種子培養基中添加40-60g/L的固定化材料，菌株在好氧富集
階段即開始邊生長邊固定，待菌體生長至對數期末期，將種子培養基過濾倒掉，保留固
定化材料，加入發酵培養基生產丁二酸，厭氧發酵至葡萄糖含量小于5g/L時，將厭氧
培養基過濾倒掉，保留固定化材料，然后加入新的發酵培養基，進行反復批次發酵；
發酵培養基的組分為：葡萄糖30-60g/L，Na₂CO₃30-60g/L，NaCl?9g/L，初始
pH7.5。
2.根據權利要求1所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，其
特征在于，所述的固定化材料為棉纖維織物、無紡布、聚酯纖維、聚乙烯醇纖維、沸石、
細菌纖維素膜、絲綢、甘蔗渣和玉米秸稈中的任意一種或幾種的組合。
3.根據權利要求1所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，其
特征在于，所述的種子培養基組分為：葡萄糖10-30g/L，KH₂PO₄5-10g/L，K₂HPO₄·3H₂O
10-20g/L，MgSO₄·7H₂O?1-5g/L，MnSO₄·H₂O?0.1-0.5g/L，FeSO₄·H₂O?0.1-0.5g/L，尿素
20-30g/L，生物素100-300μg/100ml，維生素B1100-300μg/100ml，初始pH7.5。
4.根據權利要求1或2或3所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的
方法，其特征在于，好氧富集培養過程采用搖瓶培養時，培養溫度為30-35℃，培養時
間為12-24h，轉速為200rpm；好氧富集培養過程采用發酵罐培養時，培養溫度為
30-35℃，通氣量為1-2vvm，培養時間為12-24h，轉速為350rpm。
5.根據權利要求1或2所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，
其特征在于，好氧富集培養過程采用搖瓶培養時，將固定化材料平鋪在搖瓶底部，培
養基裝液量能將固定化材料浸沒；好氧富集培養過程采用發酵罐培養時，將固定化材
料固定在擋板內側。
6.根據權利要求1所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，其
特征在于，厭氧發酵培養過程采用搖瓶培養時，培養溫度為30-35℃，培養時間為
30-50h，轉速為150rpm；厭氧發酵培養過程采用發酵罐培養時，培養溫度為30-35℃，
CO₂通氣量為0.2-0.5vvm，培養時間為30-50h，轉速為200rpm。
7.根據權利要求1所述的谷氨酸棒桿菌固定化反復批次發酵產丁二酸的方法，其
特征在于，在厭氧發酵培養過程中通過添加6M?NH₃·H₂O將pH值控制在7-8。