本發(fā)明涉及細(xì)胞研究領(lǐng)域的細(xì)胞轉(zhuǎn)分化技術(shù),特別涉及一種誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞向神經(jīng)元分化的方法。將神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)3?7天后，獲得神經(jīng)元細(xì)胞；誘導(dǎo)培養(yǎng)基為向神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液中加入維甲酸至10μM得到的；用含有DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、B27、bFGF,EGF、肝素鈉、左旋谷氨酰胺、青鏈霉素的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，培養(yǎng)3天半量更換完全培養(yǎng)基，更換出來的培養(yǎng)液即為神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液。本發(fā)明方法使分化效率提高，細(xì)胞的成熟度和神經(jīng)元細(xì)胞的神經(jīng)突觸生長(zhǎng)也有所改善；可以抑制RA處理的SH?SY5Y細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡。

1.一種誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞向神經(jīng)元分化的方法，其特征在于將神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
傳代培養(yǎng)，取25代和30代之間的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)3-7天后，獲得神經(jīng)元
細(xì)胞；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為向神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液中加入維甲酸至10μM得到的；
所述神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液是通過以下步驟得到的：
用含有DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、B27 1:50、bFGF 20ng/mL, EGF 20ng/mL、肝素鈉5μg/mL、
左旋谷氨酰胺2mM、青鏈霉素1：100的完全培養(yǎng)基在37℃，含5% CO₂的加濕溫箱中培養(yǎng)神經(jīng)
干細(xì)胞，每培養(yǎng)3天半量更換完全培養(yǎng)基，收集更換出來的培養(yǎng)液，即為神經(jīng)干細(xì)胞條件培
養(yǎng)液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化為神經(jīng)元細(xì)胞的比
例大于80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法為在含
有15%的胎牛血清、2mM的谷氨酰胺、以及1：100的青鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)
環(huán)境為37℃，含5% CO₂的加濕溫箱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞為SH-SY5Y細(xì)胞系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的制備過程中更換
出來的培養(yǎng)液用0.22μm孔徑的濾膜過濾，然后以1000RPM離心10分鐘并在顯微鏡下觀察確
保沒有細(xì)胞污染。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于1-2天更換一次誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于更換3-8次之后的培養(yǎng)液混合在一起即為神
經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液。