本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種L?鳥氨酸酶法轉(zhuǎn)化制備方法。該制備方法采用含有精氨酸的料液或精氨酸粗品或精氨酸鹽粗品為底物配制酶轉(zhuǎn)化液，加入具有精氨酸酶活性的菌體細(xì)胞或酶粗提液，在25～55℃、pH 7～11條件下進(jìn)行酶促反應(yīng)，利用等電點(diǎn)結(jié)晶和離子交換相結(jié)合的方法分離制備轉(zhuǎn)化產(chǎn)物L(fēng)?鳥氨酸鹽酸鹽。該方法以廉價的L?精氨酸料液為底物酶法合成了附加值較高的L?鳥氨酸鹽酸鹽，具有原料來源廣，酶促轉(zhuǎn)化效率高，操作簡便，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

1.一種L-鳥氨酸酶法轉(zhuǎn)化制備方法，其特征是該方法由以下步驟構(gòu)成：
(1)將糞腸球菌ATCC 8043在如下1000mL質(zhì)量體積比為g/mL的培養(yǎng)基中培養(yǎng)：玉米漿
2.0％，蛋白質(zhì)水解物0.5％，牛肉膏1％，麥芽糖1.0％，乳糖0.5％，NaCl 0.5％，磷酸二氫鉀
0.5％，七水硫酸鎂0.03％，pH 7.2，37℃振蕩培養(yǎng)16h，4000r/min離心15min得濕菌體18g；
(2)將濕菌體加入到1000mL轉(zhuǎn)化液中，轉(zhuǎn)化液為含150g/L L-精氨酸的精氨酸發(fā)酵液，
pH 9.0，再加入1.0g/L TritonX-100，40℃酶促反應(yīng)18h，反應(yīng)結(jié)束后取樣檢測轉(zhuǎn)化液中L-
鳥氨酸質(zhì)量濃度為112.7g/L，對L-精氨酸摩爾轉(zhuǎn)化率為99％；
(3)將轉(zhuǎn)化液離心去除菌體，上清液用6mol/L鹽酸中和至pH 6.0，升溫至80℃，活性炭
脫色、真空抽濾，濾液濃縮至有少量晶體析出，向濃縮液中加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)
晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽119.4g，收率83％，比旋光
c＝4，6mol/L鹽酸；
(4)結(jié)晶母液回收乙醇后用蒸餾水適當(dāng)稀釋上陽離子交換柱，L-鳥氨酸被吸附，用
1mol/L鹽酸解吸，流出液用氫氧化鈉中和至pH 6.0，活性炭脫色、真空濃縮至有晶體析出，
加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽
8.6g。
2.一種L-鳥氨酸酶法轉(zhuǎn)化制備方法，其特征是該方法由以下步驟構(gòu)成：
(1)將糞產(chǎn)堿桿菌ATCC 21400在如下1000mL質(zhì)量體積比為g/mL的培養(yǎng)基中培養(yǎng)：蛋白
胨2.0％，牛肉膏1.5％，蔗糖0.5％，果糖1.0％，NaCl 0.5％，磷酸二氫鉀0.3％，磷酸氫二鉀
0.1％，七水硫酸鎂0.05％，pH 7.2，37℃振蕩培養(yǎng)15h，4000r/min離心15min得濕菌體15g；
(2)將濕菌體加入到1000mL轉(zhuǎn)化液中，轉(zhuǎn)化液為含150g/L L-精氨酸的精氨酸離子交換
洗脫液，pH 9.0，再加入0.5g/L CTAB，45℃酶促反應(yīng)18h，反應(yīng)結(jié)束后取樣檢測轉(zhuǎn)化液中L-
鳥氨酸質(zhì)量濃度為112.7g/L，對L-精氨酸摩爾轉(zhuǎn)化率為99％；
(3)將轉(zhuǎn)化液離心去除菌體，上清液用6mol/L鹽酸中和至pH 6.0，升溫至80℃，活性炭
脫色、真空抽濾，濾液濃縮至有少量晶體析出，向濃縮液中加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)
晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽122.2g，收率85％，比旋光
c＝4，6mol/L鹽酸；
(4)結(jié)晶母液回收乙醇后用蒸餾水適當(dāng)稀釋上陽離子交換柱，L-鳥氨酸被吸附，用
1mol/L鹽酸解吸，流出液用氫氧化鈉中和至pH 6.0，活性炭脫色、真空濃縮至有晶體析出，
加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽
5.8g。
3.一種L-鳥氨酸酶法轉(zhuǎn)化制備方法，其特征是該方法由以下步驟構(gòu)成：
(1)將糞腸球菌ATCC 8043在如下1000mL質(zhì)量體積比為g/mL的培養(yǎng)基中培養(yǎng)：豆餅水解
液3％，酵母膏1％，果糖1％，乳糖0.5％，NaCl 0.5％，磷酸二氫鉀0.04％，七水硫酸鎂
0.03％，pH 7.0，37℃振蕩培養(yǎng)18h，4000r/min離心15min得濕菌體17g；
(2)將濕菌體加入到1000mL轉(zhuǎn)化液中，轉(zhuǎn)化液由重量比含量90％的精氨酸鹽粗品加水
配制而成，其中含150g/L的L-精氨酸，pH 9.0，再加入0.5g/L TritonX-100，40℃酶促反應(yīng)
22h，反應(yīng)結(jié)束后取樣檢測轉(zhuǎn)化液中L-鳥氨酸質(zhì)量濃度為112.7g/L，對L-精氨酸摩爾轉(zhuǎn)化率
為99％；
(3)將轉(zhuǎn)化液離心去除菌體，上清液用6mol/L鹽酸中和至pH 6.0，升溫至80℃，活性炭
脫色、真空抽濾，濾液濃縮至有少量晶體析出，向濃縮液中加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)
晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽120.8g，收率84％，比旋光
c＝4，6mol/L鹽酸；
(4)結(jié)晶母液回收乙醇后用蒸餾水適當(dāng)稀釋上陽離子交換柱，L-鳥氨酸被吸附，用
1mol/L鹽酸解吸，流出液用氫氧化鈉中和至pH 6.0，活性炭脫色、真空濃縮至有晶體析出，
加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽
7.0g。
4.一種L-鳥氨酸酶法轉(zhuǎn)化制備方法，其特征是該方法由以下步驟構(gòu)成：
(1)將糞腸球菌CGMCC NO.1786在如下1000mL質(zhì)量體積比為g/mL的培養(yǎng)基中培養(yǎng)：蛋白
胨1％，酵母膏1％，葡萄糖1％，蔗糖0.5％，NaCl 0.5％，磷酸二氫鉀0.04％，七水硫酸鎂
0.03％，pH 7.0，37℃振蕩培養(yǎng)18h，4000r/min離心15min得濕菌體15g；
(2)將濕菌體加入到1000mL轉(zhuǎn)化液中，轉(zhuǎn)化液由重量比含量95％的精氨酸鹽粗品加水
配制而成，其中含200g/L的L-精氨酸，pH 9.0，再加入0.5g/L TritonX-100，45℃酶促反應(yīng)
26h，反應(yīng)結(jié)束后取樣檢測轉(zhuǎn)化液中L-鳥氨酸質(zhì)量濃度為150.3g/L，對L-精氨酸摩爾轉(zhuǎn)化率
為99％；
(3)將轉(zhuǎn)化液離心去除菌體，上清液用6mol/L鹽酸中和至pH 6.0，升溫至80℃，活性炭
脫色、真空抽濾，濾液濃縮至有少量晶體析出，向濃縮液中加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)
晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽161g，收率84％，比旋光
c＝4，6mol/L鹽酸；
(4)結(jié)晶母液回收乙醇后用蒸餾水適當(dāng)稀釋上陽離子交換柱，L-鳥氨酸被吸附，用
1mol/L鹽酸解吸，流出液用氫氧化鈉中和至pH 6.0，活性炭脫色、真空濃縮至有晶體析出，
加入3倍體積的無水乙醇，冷卻結(jié)晶，抽濾、用少量乙醇洗滌晶體，干燥后得L-鳥氨酸鹽酸鹽
9.5g。