1.一種構建基因工程菌增強1，3-丙二醇生產菌株抗逆性的方法，其特征在于，
在產生PDO的野生菌中，引入β-酮基乙酰輔酶A硫解酶、NADPH依賴型乙酰乙酰
輔酶A還原酶和聚羥基脂肪酸合酶基因，使菌株在生產PDO的同時，積累高濃度PHB，
提高菌體對甘油和3-羥基丙醛的耐受性；或用于發酵聯產PHB和PDO；
所述的基因工程菌的構建步驟包括：
(1)以攜帶有β-酮基乙酰輔酶A硫解酶、NADPH依賴型乙酰乙酰輔酶A還原
酶和聚羥基脂肪酸合酶基因的質粒pBHR68為模板，通過PCR聚合酶聯反應的方法將
其操縱子phbCAB完整克隆下來；
(2)把PCR產物β-酮基乙酰輔酶A硫解酶、NADPH依賴型乙酰乙酰輔酶A還原酶
和聚羥基脂肪酸合酶基因片段純化后與克隆載體連接；
(3)篩選陽性克隆載體并分別用EcoRI和BamHI酶切，回收，連接表達載體，
構建重組表達載體pDK-CAB；
(4)將構建好的重組表達載體pDK-CAB轉化到感受態大腸桿菌中，在卡那霉素
抗性平板上篩選陽性克隆；
(5)從陽性克隆里提取重組表達載體pDK-CAB，并通過電轉化或化學轉化法將
其轉化到克雷伯氏菌感受態細胞里，鑒定并分離出陽性克隆，為目的菌株；
所構建的基因工程菌用于提高菌體對甘油和3-羥基丙醛的耐受性或發酵聯產
PDO和PHB；其工藝為：
將所構建的基因工程菌在固體培養基上培養16～24h，接入種子培養基30～37℃
有氧培養16～24h，以1％～5％的體積接種量接入以甘油為發酵底物的發酵培養基；
發酵溫度30～37℃，發酵過程中流加甘油使發酵液中甘油濃度控制在30～60g/L，pH
值控制在5.0～8.0，40～60h后停止流加至發酵結束；發酵過程中向罐中通入0.4-
1.0vvm的空氣，攪拌轉速150-250rpm；
所述的用于構建基因工程菌的野生型菌株為克雷伯氏菌；
所構建的基因工程菌發酵底物為甘油。
2.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所構建的基因工程菌發酵底物為甘油
發酵液、生物柴油副產物粗甘油或肥皂行業的副產物粗甘油。
3.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述的克隆載體為：pMD18-T-vector。
4.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述的大腸桿菌為SM10。
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