本發(fā)明公開(kāi)了一種優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX?36及其原核表達(dá)載體的構(gòu)建方法和應(yīng)用，采取的技術(shù)方案是對(duì)OCX?36基因稀有密碼子進(jìn)行改造優(yōu)化，并切除了信號(hào)肽，將優(yōu)化的OCX?36基因與載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD?19T?OCX?36，轉(zhuǎn)入到大腸桿菌C41(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行培養(yǎng)、蛋白表達(dá)，菌體細(xì)胞超聲破碎、離心、收集上清液經(jīng)一次鎳柱親和層析即可獲得蛋白rOCX?36。本發(fā)明通過(guò)對(duì)OCX?36基因序列的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了蛋白rOCX?36的可溶性表達(dá)，解決了其難于原核表達(dá)的技術(shù)問(wèn)題，表達(dá)蛋白對(duì)患有結(jié)腸炎的小鼠具有明顯改善病情的效果，顯示rOCX?36可用于制備治療結(jié)腸炎的藥物。

1.一種優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36，其特征在于：它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一種權(quán)利要求1所述基因OCX-36編碼的蛋白Ovocalyxin-36，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于：它含有權(quán)利要求1所述優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36的表達(dá)載體。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述重組表達(dá)載體，其特征在于：所述表達(dá)載體為pET28b(+)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述重組表達(dá)載體，其特征在于：所述優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36插入表達(dá)載體pET28b(+)的酶切位點(diǎn)BamHⅠ和EcoRⅠ之間。6.含有權(quán)利要求3~5中任意一項(xiàng)所述重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞，其特征在于：所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。7.一種權(quán)利要求3~5中任意一項(xiàng)所述重組表達(dá)載體的構(gòu)建方法，其特征在于：包括以下步驟：1）對(duì)OCX-36編碼基因進(jìn)行分析，根據(jù)大腸桿菌的密碼子偏好性，對(duì)OCX-36基因進(jìn)行稀有密碼子替換，并調(diào)整密碼子適應(yīng)指數(shù)，同時(shí)切除了21個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的信號(hào)肽；得到優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36，其核苷酸序列如核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；2）根據(jù)優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36序列設(shè)計(jì)特異性引物對(duì)，該引物對(duì)分別加入保護(hù)堿基和相應(yīng)的限制酶切位點(diǎn)，引物序列分別為：F- BamHⅠ:CGGGATCCATGAAGCCGCTGAAGCTTTT；R- EcoRⅠ: CGGAATTCTCACACGGAGATCGCCAACA；3）以優(yōu)化的動(dòng)物蛋白基因OCX-36的序列為模板，進(jìn)行PCR，得到PCR產(chǎn)物；4）將PCR產(chǎn)物連接到質(zhì)粒pMD-19T上，得到質(zhì)粒pMD-19T-OCX-36，5）BamHⅠ和EcoRⅠ分別對(duì)pMD-19T-OCX-36和pET28b(+)進(jìn)行雙酶切，回收得到酶切化的OCX-36和線性化的pET28b(+)；6）將酶切化的OCX-36和線性化的pET28b(+)用T4連接酶4℃連接過(guò)夜，得到連接產(chǎn)物；7）將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，異丙基硫代-β-D-半乳糖苷IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；篩選驗(yàn)證，獲得重組表達(dá)載體和含有重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。8.一種含有重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞制備蛋白Ovocalyxin-36的方法，其特征在于：包括以下步驟：1）將權(quán)利要求7所述的步驟6）得到連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)的感受態(tài)細(xì)胞；誘導(dǎo)表達(dá)；2）取誘導(dǎo)表達(dá)的菌液，加入PBS緩沖液，離心，超聲破碎后離心，保留上清液；5）上清液上樣至親和層析柱，洗脫得到蛋白Ovocalyxin-36，即為蛋白rOCX-36。9.一種利用權(quán)利要求8制備得到的蛋白Ovocalyxin-36在制備抗炎的藥品中的應(yīng)用。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：所述蛋白Ovocalyxin-36在制備抗結(jié)腸炎的藥品中的應(yīng)用。