本發明涉及一種果蠅抗菌肽伏蠅素Diptericin的制備方法。該方法的具體步驟為：果蠅伏蠅素Diptericin基因的獲得，重組質粒pGEX-4T-1-diptericin的構建以及融合蛋白的表達純化和伏蠅素Diptericin的獲得。本發明方法采用基因工程方法生產果蠅伏蠅素Diptericin，比化學合成法成本低。以大腸桿菌為表達宿主，表達量較高，達到了315.4mg/L。以pGEX-4T-1為表達載體，易于融合蛋白的純化，只需經一次親和層析便可得到純度較高的融合蛋白。只需經一次酶切便可得到純的伏蠅素Diptericin，純化簡便。

1.一種果蠅抗菌肽伏蠅素的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為：a.獲得果蠅伏蠅素Diptericin基因：提取果蠅總RNA，然后以果蠅總RNA為模板，根據果蠅diptericin基因序列設計特異性引物：上游引物D1：5′-CCGGAATTCGACGACATGACCATGAAGCC-3’；下游引物D2：5′-CCGCTCGAGCTATTAGAAATTCGGAAATC-3’；然后進行PCR擴增得到280bp的diptericin片段；b.重組質粒pGEX-4T-1-diptericin的構建：將用EcoR?I和Xho?I雙酶切后的diptericin片斷插入質粒pGEX-4T-1的EcoR?I/Xho?I之間，構成重組表達質粒pGEX-4T-1-diptericin；轉化大腸桿菌BL21，挑選出抗Ampicillin的陽性克隆；抽提質粒，用EcoR?I和Xho?I雙酶切，得到280bp左右的片段，即為重組質粒pGEX-4T-1-diptericin；c.融合蛋白的表達純化和伏蠅素Diptericin的獲得：將步驟b中挑選的成功轉化有重組表達質粒pGEX-4T-1-diptericin的大腸桿菌BL21Ampicillin的陽性克隆株在含100μg/mlAmpicillin的2×YT液體培養基中培養至OD600值達到0.6，加入100mMIPTG儲液至終濃度為1.0mM；繼續培養4小時后離心，收集菌體，用緩沖液重懸菌體，超聲破菌后，離心收集上清，進行親和層析，收集果蠅伏蠅素Diptericin的融合蛋白組分，用凝血酶酶切融合蛋白，4℃下反應16小時，終止反應，再次進行親和層析，收集流出組分，冷凍干燥，得到果蠅抗菌肽伏蠅素Diptericin。