1.一種鹵醇脫鹵酶的快速篩選方法，其特征在于：用pH顯色經過初篩和復篩兩步法來
篩選高酶活的鹵醇脫鹵酶，其包括如下步驟：
（1）將含有鹵醇脫鹵酶基因的大腸桿菌的單菌落稀釋后接種于裝有液體培養基深孔板
的多個孔中，在搖床中進行兩次培養；
（2）將深孔板超低溫冷凍然后室溫融化，至少重復進行2次；
（3）將前述經過凍融的深孔板進行離心處理，取上清液為粗酶液；
（4）將粗酶液和含有鹵醇脫鹵酶基因的大腸桿菌的單菌落分別加入不同個裝有反應底
物和去離子水及pH指示劑混合液的反應管中，將加入含有鹵醇脫鹵酶基因的大腸桿菌單菌
落的反應管作為參照管，在相同條件下反應，篩選出比參照管顏色變化快的鹵醇脫鹵酶單
菌落，完成初篩；
（5）將初篩所得的鹵醇脫鹵酶單菌落對應的粗酶液分別加入不同個裝有反應底物、去
離子水混合液的反應管中，用pH計在線監測各管內體系的pH的變化，同樣以含有鹵醇脫鹵
酶基因的大腸桿菌單菌落反應管作為參照管，復篩出單位時間內pH變化量比參照管大的鹵
醇脫鹵酶單菌落，即為高酶活的鹵醇脫鹵酶；
初篩和復篩的反應底物均為（S）-4-氯-3-羥基丁酸乙酯和氰化鈉的混合物，（S）-4-氯-
3-羥基丁酸乙酯的濃度為10-50毫摩每升，氰化鈉的濃度為10-80毫摩每升；
初篩所用的pH指示劑為1.0g/l溴甲酚紫鈉鹽和1.0g/l的溴百里酚藍鈉鹽水溶液的混
合指示劑。
2.根據權利要求1所述的鹵醇脫鹵酶的快速篩選方法，其特征在于：初篩時pH指示劑的
加入量為反應體系液體體積的0.005%-0.05%。
3.根據權利要求1所述的鹵醇脫鹵酶的快速篩選方法，其特征在于：初篩時pH指示劑的
加入量為反應體系液體體積的0.02%。
4.根據權利要求1所述的鹵醇脫鹵酶的快速篩選方法，其特征在于：（S）-4-氯-3-羥基
丁酸乙酯的濃度為30毫摩每升，氰化鈉的濃度為30毫摩每升。
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