本發明涉及干細胞領域，公開了臍帶間充質干細胞的凍存保護液及凍存方法。本發明所述臍帶間充質干細胞的凍存保護液包括10v/v％?20v/v％DMSO、30v/v％?80v/v％臍帶間充質干細胞條件培養基、10v/v％?50v/v％胎牛血清。采用本發明所述臍帶間充質干細胞的凍存保護液凍存后復蘇，細胞回收率明顯高于常規凍存液，細胞增殖能力也優于常規細胞凍存液。本發明所述臍帶間充質干細胞的凍存方法將臍帶間充質干細胞消化離心，加入臍帶間充質干細胞條件培養基調整細胞密度，加入等體積的所述凍存保護液后凍存細胞。本發明所述凍存方法凍存的細胞復蘇后細胞回收率明顯高于常規方法，細胞增殖能力也優于常規的凍存方法。

1.一種臍帶間充質干細胞的凍存保護液，由10v/v％-20v/v％DMSO、30v/v％-80v/v％
臍帶間充質干細胞條件培養基和10v/v％-50v/v％胎牛血清組成。
2.根據權利要求1所述的凍存保護液，所述臍帶間充質干細胞條件培養基的制備方法
為：取P1-P5代的臍帶間充質干細胞酶解消化后傳代，連續培養24-72h后，收集培養上清，離
心后取上清。
3.根據權利要求2所述的凍存保護液，所述臍帶間充質干細胞條件培養基的制備方法
中所述酶解消化具體為向細胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和
0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，完全培養基終止酶解。
4.根據權利要求2所述的凍存保護液，所述臍帶間充質干細胞條件培養基的制備方法
中所述傳代為酶解消化后的細胞離心，完全培養基重選后，按80000個細胞/cm²-15000個細
胞/cm²的傳代密度傳代，細胞連續生長24h-72h。
5.根據權利要求2所述的凍存保護液，所述臍帶間充質干細胞條件培養基的制備方法
中所述離心為200g-400g離心5min。
6.權利要求1所述臍帶間充質干細胞的凍存保護液的制備方法，按比例將臍帶間充質
干細胞條件培養基與胎牛血清混合，然后加入DMSO，冰水浴中降溫至0℃。
7.一種臍帶間充質干細胞的凍存方法，將臍帶間充質干細胞消化離心后，加入臍帶間
充質干細胞條件培養基，調整細胞密度至0.1×10⁶個/mL-10×10⁶個/mL，加入等體積的權利
要求1所述臍帶間充質干細胞的凍存保護液，混勻后，分裝至凍存管中，-80℃中凍存1天-5
天，轉移至液氮中長久保存。
8.根據權利要求7所述的凍存方法，所述消化為向細胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²
的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，用5倍-10倍于消化液的完全
培養基終止酶解。
9.一種臍帶間充質干細胞的凍存試劑盒，包含權利要求1所述臍帶間充質干細胞的凍
存保護液。