1.一種睡蓮組織培養(yǎng)的方法,其特征在于:該方法包括如下步驟:
1)、培養(yǎng)基的配制:
(1)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基,其上層均為無菌蒸餾水;下層為MS固體培養(yǎng)基,
其中蔗糖20~30g/L,瓊脂5~9g/L,pH=5.8;
(2)誘導培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ1.0~3.0mg/L+NAA0.05~0.5mg/L+活性炭0.2~0.5mg/L;
(3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA2.0~4.0mg/L+NAA0.1~0.5mg/L;
(4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA0.05~0.2mg/L+IBA0.05~0.2mg/L;
2)外植體的選取與消毒:將睡蓮根莖上的頂芽及側芽周緣修整光滑,清洗并消毒后備用;
3)不定芽的誘導及增殖:將步驟2)消毒處理后的芽在無菌條件下接種于誘導培養(yǎng)基上,
經(jīng)1~2個月后可直接誘導出不定芽,將不定芽轉接到增殖培養(yǎng)基上進一步進行增殖;
4)生根培養(yǎng):將步驟3)增殖獲得的不定芽在無菌條件下切割后轉接到生根培養(yǎng)基上,
培養(yǎng)15~25天后生根;
5)移栽:將步驟4)生根后睡蓮植株從培養(yǎng)基中取出并清洗,然后移栽至泥水槽中栽培。
2.根據(jù)權利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法,其特征在于:在所述步驟1)中,所述
的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分具體為:
(1)基本培養(yǎng)基:采用固液雙層培養(yǎng)基,其上層均為無菌蒸餾水;下層為MS固體培養(yǎng)基,
其中蔗糖20~30g/L,瓊脂5~9g/L,pH=5.8;
(2)誘導培養(yǎng)基固體層:MS+TDZ2.0mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭0.2mg/L;
(3)增殖培養(yǎng)基固體層:MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L;
(4)生根培養(yǎng)基固體層:MS+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L。
3.根據(jù)權利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法,其特征在于:在所述步驟2)中,所述
的消毒處理是:挖取睡蓮根莖去除葉片后將頂芽、側芽連同部分根莖組織切下,用鋒利的刀
片將芽體周緣修整光滑后用飽和洗衣粉溶液浸泡20~60min,然后再用自來水沖洗干凈,接著
依次在體積比濃度為70%的酒精、有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液和0.1%的升汞溶液中分
別浸泡0.5~1min、4~8min和4~6min,最后用無菌水沖洗3~5次。
4.根據(jù)權利要求1所述的睡蓮組織培養(yǎng)的方法,其特征在于:在所述步驟3)中,所述
的不定芽的誘導和增殖為:將消毒處理后的芽體接種于誘導培養(yǎng)基的固體層中誘導不定芽萌
出,將誘導出的不定芽切下后轉接到增殖培養(yǎng)基中進行增殖。
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