本發明公開了一種扎伊爾型埃博拉病毒恒溫擴增檢測試劑盒，所述試劑盒包括RNA提取試劑、恒溫擴增反應液、陽性對照和陰性對照；本發明的檢測試劑盒特異性高、靈敏度高；從病毒RNA逆轉錄到鏈置換擴增全部恒定同一溫度，恒溫擴增僅需35分鐘，核酸試紙條檢測結果需1?2分鐘，全程從接受樣品到獲得結果整個檢測過程僅需1小時左右，且整個反應過程只需一個恒溫儀器，特別適合現場快速檢測使用。

1.一種扎伊爾型埃博拉病毒恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括下列組
成：
(1)RNA提取試劑；
(2)恒溫擴增反應液：包括正向外圍引物，反向外圍引物，兩條探針，兩條擴增交叉引
物，1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶，AMV逆轉錄酶和無菌雙蒸水；
所述正向外圍引物為：5′-TGGTTCAAGTGCACAGTCAA-3′；
反向外圍引物為：5′-TGTCTGCTCTACGGTGATGT-3′；
所述兩條探針的序列分別為：
正向5’端Biotin標記探針5′-Biotin-GCAAGGGTTGTCAGATGCG-3′；
反向3’端FitC標記探針5′-Fitc-ATAATACACCCGTGTATAAAC
TTGAC-3′；
所述兩條擴增交叉引物分別為：
擴增正向引物：
5′-AGGGATTGGGGACTCGTGGAGGGAAGGAAAGCTGCAGTGT-3′；擴增反向引物：
5′-CCAAACCAGGTCCGGACAACAGTCCAACTTGAGTTGCCTCAG-3′；
(3)陽性對照：含有扎伊爾型埃博拉病毒的糖蛋白DNA質粒；
(4)陰性對照：無菌雙蒸水；
所述1×Thermol Buffer含有摩爾濃度為20mM的Tris-HCl、10mM的KCl、10mM的(NH₄)
₂SO₄、2mM的MgSO₄以及質量濃度為0.1％的Triton X-100，pH 8.8。
2.如權利要求1所述扎伊爾型埃博拉病毒恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于所述陽性
對照為含有長189bp的扎伊爾型埃博拉病毒糖蛋白基因序列，序列如下：
TGGTTCAAGTGCACAGTCAAGGAAGGAAAGCTGCAGTGTCGCATCTGACAACCCTTGCCACAATCTCCACGAG
TCCCCAATCCCTCACAACCAAACCAGGTCCGGACAACAGCACCCATAATACACCCGTGTATAAACTTGACATCTCTG
AGGCAACTCAAGTTGGACAACATCACCGTAGAGCAGACA。
3.如權利要求1所述扎伊爾型埃博拉病毒恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于所述陽性
對照按如下步驟制備：
以包含擴增區域的埃博拉糖蛋白基因片段為模板，通過兩條外圍引物進行PCR擴增獲
得目的基因；利用PCR純化試劑盒對PCR擴增產物進行純化；將純化后的擴增產物通過T-
easy質粒轉染試劑盒構建完整的含有目的基因的質粒序列，用分光光度計對所抽提的質粒
測A₂₈₀定量并稀釋至10個拷貝/μl，-20℃保存。
4.如權利要求1所述扎伊爾型埃博拉病毒恒溫擴增檢測試劑盒，其特征在于所述恒溫
擴增反應液組成為：兩條外圍引物各自10pmol，兩條探針各自20pmol，兩條交叉引物各自
40pmol，1×Thermol buffer，MgSO₄為6mmol，dNTPs溶液各0.4mmol，Bst DNA聚合酶8U，AMV
逆轉錄酶5U，無菌雙蒸水組成補足至25μl。