本發(fā)明公開了一種青枯菌噬菌體的應(yīng)用方法，將青枯菌噬菌體液置于斜插在煙株莖稈的無菌注射器針頭中，然后用無菌礦物油覆蓋青枯菌噬菌體液防止蒸發(fā)和污染，使青枯菌噬菌體通過無菌注射器針頭直接進(jìn)入煙株莖稈中。本發(fā)明根據(jù)青枯病是典型細(xì)菌性維管束病害的特征，設(shè)計(jì)利用噬菌體資源以防治青枯病的應(yīng)用方法，該方法應(yīng)用于作物青枯病的防控，可以減少青枯菌噬菌體的施用量，避免陽光、紫外線、雨水等外界因素的影響，還能避免或延緩病原青枯菌與其噬菌體因長期接觸通過的協(xié)同進(jìn)化作用而獲得對(duì)噬菌體的抗性。

1.一種青枯菌噬菌體的應(yīng)用方法，其特征在于：將青枯菌噬菌體液置于斜插在煙株莖
稈的無菌注射器針頭中，然后用無菌礦物油覆蓋青枯菌噬菌體液防止蒸發(fā)和污染，使青枯
菌噬菌體通過無菌注射器針頭直接進(jìn)入煙株莖稈中；所述無菌礦物油的制備方法為：將
300ml礦物油倒入500ml螺口瓶，在121℃下滅菌30min，然后冷卻后保存?zhèn)溆茫凰鰺o菌注射
器針頭的制備方法為：用無菌水泡針頭過夜，無菌水沖洗兩次，高壓滅菌后50℃烘干，待冷
卻至室溫后，分裝好保存?zhèn)溆茫幻總€(gè)煙株莖稈注射青枯菌噬菌體液50-100微升；在插入煙株
莖稈的無菌注射器針頭中，滴入無菌礦物油的量為50-100微升。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯菌噬菌體的應(yīng)用方法，其特征在于：所述青枯菌噬菌體液
的制備方法為：采用共培養(yǎng)的方法擴(kuò)繁青枯菌噬菌體株系，在滅菌后的500ml三角瓶中，加
入300mlCPG液體培養(yǎng)基和300μl含青枯菌的無菌水，在28℃下震蕩培養(yǎng)2-4h，吸光值OD₆₀₀在
0.2-0.3之間，再加入300μl含噬菌體的無菌水，在28℃下繼續(xù)震蕩培養(yǎng)2-3h；之后以8000r/
min的轉(zhuǎn)速離心培養(yǎng)液10min，取上清液，用0.22μm的濾膜過濾，取濾液備用，其中所述CPG液
體培養(yǎng)基采用以下方法制作：水解酪蛋白：1g；蛋白胨：10g；葡萄糖：5g；蒸餾水：1000ml；酸
度調(diào)節(jié)到pH7.0，在121℃下滅菌30min；冷卻至55℃，分裝到培養(yǎng)皿中備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青枯菌噬菌體的應(yīng)用方法，其特征在于：煙株莖稈輸入青枯菌
噬菌體時(shí)間為：煙株移栽到培養(yǎng)缽或田間后的旺長時(shí)期。