本發明公開了一種發酵生產葡萄糖氧化酶酶活的方法，屬于發酵工程領域。本發明采用本實驗室在前期工作中構建的可以產較高活性葡萄糖氧化酶的重組畢赤酵母Pichia pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏編號為CCTCC NO：M 2012266。在甲醇誘導階段通過添加山梨醇來提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制發酵液中甲醇殘留濃度1.8%(W/V)，且甲醇與山梨醇混合添加比例為10:1(W/W)時，葡萄糖氧化酶的酶活為645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效縮短了發酵周期，這為葡萄糖氧化酶的大規模生產奠定了良好的基礎。

1.一種發酵生產葡萄糖氧化酶的方法，以一種產葡萄糖氧化酶的基因工程菌為生產菌株，
保藏編號為CCTCC?NO：M2012266，于2012年7月3日保藏于中國典型培養物保藏中心；
其特征在于將活化后YPD擴培的菌液接入全自動發酵罐中的發酵培養基進行發酵處理，接種
量為10％，以25％氨水控制pH5.5，溫度30℃，調節攪拌轉速和通氣量維持溶氧30％以上；
當甘油耗盡溶解氧迅速上升時，開始流加50％甘油補料生長培養基，當菌體干重達到100g/L
后，停止補料；待甘油再次耗盡，繼續保持基質匱乏狀態1h后，開始流加誘導培養基，誘
導條件為：溫度降低至20-25℃，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例為10:1-5:1(W/W)，并
且維持整個誘導過程的甲醇濃度為1.5-2.5％(W/V)，誘導葡萄糖氧化酶表達。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于誘導條件優選：溫度降低至22℃，控制甲
醇和山梨醇的混合添加比例為10:1(W/W)，并且維持整個誘導過程的甲醇濃度為1.8％
(W/V)，誘導葡萄糖氧化酶表達。
3.權利要求1所述的方法，其特征在于所述發酵培養基組成為：85％磷酸26.7mL/L,CaSO₄
0.93g/L,K₂SO₄18.2g/L,MgSO₄·7H₂O14.9g/L,KOH4.13g/L,甘油40.0g/L,PTM₁4.35mL/L,
25％氨水調pH5.5；其中每升PTM₁組成為：CuSO₄,6.0g；KI,0.08g；MnSO₄,3.0g；Na₂MoO₄,
0.2g；H₃BO₃,0.02g；CoCl₂,0.5g；ZnCl₂,20.0g；FeSO₄·7H₂O,65.0g；biotin,0.2g和98％(w/w)
H₂SO₄,5mL。
4.權利要求3所述的方法，其特征在于所述補料生長培養基：50％(W/V)甘油，其中含
12mL/LPTM₁。
5.權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述誘導培養基組成為：含12mL/LPTM₁
的100％甲醇與含12mL/LPTM₁的山梨醇混合之比為10：1(W/W)。