本發(fā)明公開了一種純化包涵體蛋白質(zhì)的方法，將包涵體蛋白質(zhì)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)并在4℃離心，培養(yǎng)基上清液直接純化；細(xì)胞團(tuán)塊超聲裂解、離心后，棄上清液，加入1Xbindbuffer重懸包涵體團(tuán)塊，超聲裂解、離心，將該上清液加至Ni層析柱，流出液用3倍體積的1XBindbuffer洗滌柱床和3倍體積的Washbuffer洗滌柱床洗滌；依次加入含精氨酸的四種復(fù)性buffer至Ni層析柱,收集流出液；再加入Elutebuffer至Ni層析柱洗脫目標(biāo)蛋白；取純化的培養(yǎng)基上清液加至透析袋，用PBS于4℃透析2h，4℃離心15min沉淀目標(biāo)蛋白。本發(fā)明方法快速、簡便、有效地獲得具有生物學(xué)活性的目標(biāo)蛋白，降低了生產(chǎn)成本。

1.一種純化包涵體蛋白質(zhì)的方法，其步驟包括：將目的基因克隆入pET28a、pET44、pET32、?pWH1520或?pBAD表達(dá)載體中，經(jīng)酶切、測序鑒定后，轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌株BL21(DE3)、Rosetta-gami?B(DE3)?pLysS或Rosetta-gami2?B?pLysS中，加甘油-80℃保存?zhèn)溆茫蝗「视捅４娴霓D(zhuǎn)化子在含抗生素卡那霉素、氨芐青霉素或鏈霉素的LB平板上劃線，37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)，挑單克隆，接種于5mL?LB/抗生素培養(yǎng)基，37℃200rpm振蕩培養(yǎng)至OD600為0.6，加1mM?IPTG至上述菌液中繼續(xù)培養(yǎng)，在1h、2h、12h三個時間點(diǎn)各取100μL菌液，離心后將上清液以TCA沉淀，細(xì)胞團(tuán)塊以2XSDS上樣液溶解，上至SDS-PAGE以檢測目標(biāo)蛋白表達(dá)，IPTG誘導(dǎo)過的細(xì)菌團(tuán)塊于-80℃保存；取上述-80℃保存的IPTG誘導(dǎo)過的細(xì)菌團(tuán)塊，加500μL?1×?PBS，在冰上超聲3次、每次15sec，間隔3min，再于4℃12000rpm離心15min，收集上清液，取10μL上清液和沉淀作SDS-PAGE鑒定；根據(jù)鑒定結(jié)果擴(kuò)大誘導(dǎo)規(guī)模至500mL，將大規(guī)模誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化子在4℃離心，培養(yǎng)基上清液直接純化；細(xì)胞團(tuán)塊加20mL由50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、10?mM咪唑、8?M尿素組成的?Bind?buffer和200μL?PMSF超聲裂解5次，每次30sec、間隔3min，4℃離心20min，棄上清液，加入1X?bind?buffer重懸包涵體團(tuán)塊，超聲裂解5次，每次30sec、間隔3min，4℃離心20min，將該上清液加至Ni層析柱；用3倍體積的1X?Bind?buffer洗滌柱床洗滌后，用3倍體積的由50?mM?phosphate?8.0、?300?mM?NaCl、20?mM咪唑、8?M尿素組成的Wash?buffer洗滌柱床洗滌，再依次加入每種5?ml復(fù)性buffer至Ni層析柱,?收集流出液，加入5?ml由50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、250?mM咪唑組成的Elute?buffer至Ni層析柱以洗脫目標(biāo)蛋白，以0.5?x?10組份收集確定洗脫峰，取純化的培養(yǎng)基上清液加至透析袋，在PBS中于4℃攪拌透析2h，4℃12000rpm離心15min沉淀目標(biāo)蛋白；所述每種5?ml復(fù)性buffer次序?yàn)椋????1）50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、20?mM咪唑、0.6?M精氨酸、4?M尿素，????2）50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、20?mM咪唑、0.6?M精氨酸、2?M尿素，????3）50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、20?mM咪唑、0.6?M精氨酸、1?M尿素，????4)?50?mM?phosphate?8.0、300?mM?NaCl、20?mM咪唑、0.6?M精氨酸、0.5?M尿素。